[发明专利]叶酸的制备纯化方法

说明书

本发明提供一种制备叶酸标准物质的方法，该方法包括使用制备型高效液相色谱法进行纯化的步骤。所述方法可得到纯度高达99.5％的叶酸标准物质，满足标准物质制备的要求。

技术领域

本发明涉及叶酸标准物质的制备方法，特别是利用制备型高效液相色谱制备高纯叶酸的方法。本发明的方法特别可用于制备叶酸标准物质。

背景技术

叶酸(Folic acid)简称FA，又称维生素M、维生素Bc等，1941年被分离提纯并定名为叶酸(因存在于叶片)。其化学名称是蝶酰谷氨酸(Pteroylglutamic acid，简写为PGA)。叶酸泛指水溶性B族复合体维生素，其分子主要是由蝶啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸三部分组成，而叶酸化学结构形式的不同在于蝶啶环的氧化状态即N5和N10上的一碳单位及谷氨酸之间的聚合。

叶酸通常为黄色或橙黄色薄片或针状晶体，无臭无味，熔点250℃，加热至250℃立即分解，叶酸溶于热水和碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠等碱性溶液，微溶于冷水、乙醇，不溶于氯仿、乙醚和苯等有机溶剂。叶酸在酸性环境下不稳定，当pH低于4.5时即被完全破坏；但在碱性或中性溶液中对热稳定，即使加热到100℃达1h也不会被破坏；但在光照条件下易被分解，尤其易被紫外线所破坏，常温下保存也可引起很大的损失，分子式为C₁₉H₁₉N₇O₆，分子量为441.4，其结构式如下所示：

叶酸主要分布在动物肝脏、绿叶蔬菜和微生物中，酵母细胞中含有较多的叶酸。它是维持生物体正常生命过程所必需的一类有机物质，虽然需要量很少，但对维持健康十分重要。生化与医学研究者已证明，叶酸作为 一种辅助因子，对嘌呤、核酸、蛋白质的合成具有特别重要作用，另外它在帮助细胞快速分裂、生长以及修复和甲基化DNA等方面也扮演重要角色，所以不管儿童还是成人都需要叶酸来更新健康的红细胞并预防贫血。

叶酸与人体健康有着非常密切的关系，主要表现在叶酸对怀孕、生育能力、心脏疾病以及癌症等方面的影响。如怀孕期间补充叶酸能够降低婴儿先天性心脏缺陷、唇裂、肢体缺陷和尿路异常的风险；叶酸有助于精子产生，对人类的生育能力是非常重要的；服用叶酸不能减少心血管疾病和癌症的发生，但是能降低同型半胱氨酸的含量，所以可以预防心脏疾病和癌症。

截至目前，由于叶酸的热不稳定性和光不稳定性，国内对叶酸标准物质的研究还较少，叶酸的提取纯化工艺还停留在耗能大、耗时长、提取率低的初级阶段，而且得到的叶酸纯度也达不到标准物质的要求。杨芳等(“酵母发酵液中叶酸的分离纯化”，《现代商贸工业》，2003年12期)从不同发酵液中分离纯化叶酸，分别经过透析、微滤，硅胶柱层析等过程，得到叶酸含量最高为1.43μg/mL；刘艳等(“硅胶柱分离纯化发酵液中叶酸的工艺研究”，《食品工业科技》，2011年8期)采用硅胶柱层析分离纯化叶酸，得到的叶酸质量为101.12(±0.13)μg。以上方法得到的叶酸产品纯度和产率都较低。

由于绝大多数定量分析方法都是基于直接或间接与已知值比较而进行的，因此提供具有已知组成和性质的参考样品(即标准物质)供准确校正对于定量分析来说是非常必要的，这些标准物质在一种或多种性质方面具有高度一致的值。与常规的实验室试剂不同，在同一标准物质样品内部各部分之间以及同批次标准物质的不同样品之间具有高度一致性，从而使得这些标准物质能够用于在分析过程中校准分析仪器以及分析方法等。

标准物质通常要求高纯度，其组成与化学式高度一致并且化学稳定。由于对标准物质的这种严格要求，标准物质的制备一般需要在高度受控的条件下制造，以达到这种高纯度，并尽可能避免所含杂质对后续测定的影响。因此，标准物质的制备比常规分析化学试剂往往要复杂得多，经常需要多种高精度的分离纯化操作步骤(如HPLC等)，同时也造成其高的制造成本。