[发明专利]一种白花虎眼万年青的组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本申请属于植物繁殖技术领域，具体地说，涉及一种白花虎眼万年青的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

白花虎眼万年青(Ornithogalum thyroides)是百合科虎眼万年青属(Ornithogalum spp)的多年生球茎花卉，高25～50厘米，有皮鳞茎圆形光滑，观赏价值高。叶基部丛生，披针形而长，顶端具长尾，深绿色，无柄。花小型，总状花序紧密，金字塔形，生于从叶丛中抽生的花葶顶部，25多以上小花，花形杯状，花色白色，花瓣中央无绿色条纹。

不但其花朵及球茎具有较高的观赏价值，可广泛应用于园林绿化和作为鲜切花，而且化学成分分析表明，其中含有甾醇糖苷、胆甾烷糖苷等次生代谢物质，具有潜在的药用和经济价值。

随着经济社会及园林事业的发展，球根花卉因为具有种类丰富、花色艳丽、花期较长、栽培容易、适应性强等特点和优点，在园林中应用越来越多，可广泛作为切花、地被和盆花等，亦具有较高的药用和经济价值。虎眼万年青属植物作为百合科多年生鳞茎花卉，有150多种，因其具有较高的观赏价值，以及较高的药用价值，愈来愈受到瞩目。

但是球根花卉的繁育无论在野生还是离体条件下，基本是采用地下的球茎，普遍存在着再生困难、种球繁育系数低及种质创新难等突出问题，虎眼万年青属植物也不例外，成为制约其研究开发的瓶颈。

发明内容

有鉴于此，本申请针对采用地下球茎繁殖存在再生困难、种球繁殖系数低的问题，提供了一种白花虎眼万年青的组织培养快速繁殖方法，具有操作简便、增殖系数高的显著优点，可实现优质种苗的工厂化规模化生产。

为了解决上述技术问题，本申请公开了一种白花虎眼万年青的组织培养快速繁殖方法，选取白花虎眼万年青的叶片作为组培用的外植体；通过叶片表面珠芽诱导培养形成种苗，或者通过叶片愈伤组织诱导培养、不定芽诱导培养、生根培养形成种苗；待种苗长出不定根后，进行组培苗驯化移栽，然后正常培养。

进一步地，具体包括以下步骤：

步骤1，外植体的选择及处理

选取白花虎眼万年青的叶片为起始材料，将采集到的叶片切成2～4cm的叶段，作为组培用的外植体；

步骤2，对叶片进行诱导形成种苗

将经过表面消毒的外植体接种于珠芽诱导培养基MS+TDZ2.0mg/L上在光照处培养，待叶片表面逐渐形成完整的根系后，将根系插入培养基中成为新的种苗；

或者，将经过表面消毒的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+2,4D2.0mg/L上进行暗培养，待叶片切口处形成白色或淡黄色的愈伤组织，然后接种于不定芽诱导培养基MS+6BA2.0mg/L，放在光照处培养，愈伤组织逐渐形成不定芽，再将其转接到生根培养基MS+IBA1.0mg/L上，20～30d后，生根成苗成为新的种苗；

步骤3，组培苗驯化移栽

待种苗长出3～5条2～3cm的不定根后，进行炼苗，然后将组培苗移栽到培养基质中进行缓苗，再正常培养。

进一步地，培养温度为25℃。

进一步地，光照时间为12～14h/d，光照强度为40～60u.Mol.m^-2.s^-1。

进一步地，珠芽诱导、愈伤组织诱导、不定芽诱导及生根培养，所用的基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为20～40g/L，凝固剂为琼脂粉、用量为6～7g/L，培养基pH为5.8。

进一步地，所述炼苗具体为：先在组培室打开瓶盖炼苗3天，然后将其移至温室或荫棚，再炼苗3天。

进一步地，所述培养基质由沙壤土与草炭土按质量比3:1组成。

进一步地，所述培养基质的含水量25％以内，空气相对湿度80～90％。

与现有技术相比，本申请可以获得包括以下技术效果：

(1)本申请通过选取白花虎眼万年青的叶片作为组培用的外植体；通过叶片表面珠芽诱导培养形成种苗，或者通过叶片愈伤组织诱导培养、不定芽诱导培养、生根培养形成种苗；待种苗长出不定根后，进行组培苗驯化移栽，然后正常培养，解决了采用地下球茎繁殖存在再生困难、种球繁殖系数低的问题，具有操作简便、增殖系数高的显著优点，不受地区、季节、气候限制，可实现优质种苗的工厂化规模化生产。

(2)从母株上剪下叶片，以叶片为外植体，一个叶片上形成多个珠芽，繁殖系数达3～10，是一般繁殖方式的十几倍甚至几十倍，而且对植株本身损伤较少，母株可以继续生长和利用，实现可持续生产和发展。