[发明专利]一种抗蛋白吸附毛细管柱及其制备方法

说明书

本发明涉及一种抗蛋白吸附毛细管柱，所述毛细管内壁修饰有若干抗蛋白吸附共价键合涂层，所述的抗蛋白共价键合涂层是由感光重氮树脂和羧化壳聚糖经紫外光照射发生光固化交联反应形成，每一层所述抗蛋白共价键合涂层的厚度为1.1～1.8nm。其制备方法通过使用羧化壳聚糖与感光重氮树脂静电自组装并光固化交联而形成共价键合抗蛋白吸附涂层。制备得到抗蛋白吸附毛细管柱的分离效率显著提高，而且抗蛋白吸附性能也比较好。此方法的制备过程相对简单易操作，成本低廉，重复性好，无毒安全环保，且稳定性及抗蛋白吸附性能良好，可以用于对蛋白质，酶，肽链以及激素等物质的分离检测和纯化。

技术领域

本发明涉及毛细管柱分离的技术领域，具体涉及一种抗蛋白吸附毛细管柱以及这种毛细管柱的制备方法。

背景技术

近些年来，毛细管电泳技术在分析蛋白质、生物聚合物或者药物中的应用越来越广泛，已经成为现代化的一种效率极高的分离手段，但是随着这项技术的发展，需要克服的问题也越来越多，比如其重复性差，显著的峰拖尾，使用寿命较短，毛细管内壁对样品的吸附等等。通过改变缓冲液的浓度和PH值，或通过非共价或共价键合对毛细管动态涂层改性可以有效地解决以上一些问题。

然而，非共价键合涂层存在普遍的寿命较短，分离效率不高的问题，相比之下，共价键合涂层的寿命更长、稳定性更好且分离效率更高。但是共价键合涂层的制备过程通常是中是比较复杂的，既费时又费劳力，而且还会涉及到毛细管硅烷化等复杂的反应，有些还会用到比较昂贵或者有毒易燃易爆等危险的试剂，这些都对毛细管共价键合涂层带来很大的阻力。如：(1)Gerald Kleindiens等在《Electrophoresis》1998,19,262-269报道了利用聚苯乙烯(PS)衍生物和硅烷化试剂制备了抗蛋白吸附的毛细管电泳共价键合涂层柱。制作过程较为繁琐，所需的药品较多，成本昂贵，而且所用的四氢呋喃具有毒性；(2)Timperman等在《Analytical Chemistry》杂志2006,78,4326-4333报道了利用含聚乙二醇(PEG)的硅烷化试剂制备了抗蛋白吸附的毛细管芯片电泳共价键合涂层柱。其制备过程耗时较长，所用的硅烷化试剂具有毒性、易水解且成本昂贵。(3)Xiaofang Fu等在《Electrophoresis》2007,28,1958–1963报道了使用羧甲基壳聚糖涂层，虽然其制备过程简单，容易操作，但是所用的硅烷化试剂含有乙腈(ACN)，也是一种有毒且易燃的试剂，并存在爆炸的潜在可能性，对于实验的进行具有一定的危险性。

以上所列出的毛细管电泳共价键合涂层柱的制备方法，有的制备过程复杂，不易操作，有的试剂昂贵，成本过高，生产过程具有毒性或易燃性，有的涂层质量不稳定，分离效率不高等。这些存在的问题都很大程度上限制了毛细管电泳在蛋白质分析中的应用。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有的制备工艺流程复杂、操作条件苛刻、生产过程毒性大、生产效率低、生产成本高、所制备抗蛋白吸附毛细管电泳共价键合涂层柱质量不佳的问题，进而提供一种抗蛋白吸附毛细管柱及其制备方法，其工艺流程简便、生产过程环保、生产效率高、生产成本低、所制备抗蛋白吸附毛细管电泳共价键合涂层柱质量好。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种抗蛋白吸附毛细管柱，所述毛细管内壁修饰有若干抗蛋白吸附共价键合涂层，所述的抗蛋白共价键合涂层是由感光重氮树脂和羧化壳聚糖经紫外光照射发生光固化交联反应形成，每一层所述抗蛋白共价键合涂层的厚度为1.1～1.8nm。

一种抗蛋白吸附毛细管柱的制备方法，包括下述步骤：

S1、浓度为0.05-500mg·ml^-1的感光重氮树脂溶液，水，浓度为0.05-500mg·ml^-1的羧化壳聚糖水溶液和水先后缓慢注入毛细管内；所述感光重氮树脂和所述羧化壳聚糖水溶液的质量比为1:1.0～1:1.5；