[发明专利]与肌层浸润性膀胱癌相关的尿液蛋白质标志物

说明书

发明领域

本公开涉及膀胱癌，尤其是肌层浸润膀胱癌的诊断和预后。具体地，本公开涉及使用CYR61蛋白来诊断肌层浸润膀胱癌的方法、用途和相关的试剂盒。本发明还涉及将CYR61蛋白与MMP2蛋白、VEGFC蛋白和/或VEGF蛋白组合用来诊断肌层浸润膀胱癌，以及相关的方法、用途和试剂盒。

发明背景

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。膀胱癌占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位，而在西方其发病率仅次于前列腺癌，居第2位。膀胱癌的90％以上为尿路上皮癌。首诊时约70％左右的膀胱癌为非肌层浸润性癌，组织病理学分期Ta、T1；25％为肌层浸润性癌，组织病理学分期T2～T4；5％的病例已经发生肿瘤远处转移，因此临床上对于初诊的膀胱癌主要将其分为非肌层浸润性癌和肌层浸润性膀胱癌两大类型。

非肌层浸润和肌层浸润性膀胱癌两者的治疗方式和预后存在明显差异。非肌层浸润膀胱癌的治疗以经尿道膀胱肿瘤电切术为主，而肌层浸润性膀胱癌则需要进行新辅助化疗联合根治性全膀胱切除或根治性全膀胱切除。目前一些肌层浸润性膀胱癌病例因术前无法评估肿瘤是否侵及肌层而进行了经尿道肿瘤电切术，影响后续治疗及肿瘤预后。因此，在手术前准确判断肿瘤是否发生肌层浸润，对膀胱癌的治疗方案选择以及预后判断至关重要。

临床术前判断膀胱癌是否发生肌层浸润主要依靠MRI等影像学检查及膀胱镜联合组织病理活检。然而，影像诊断结果很大程度上依赖于临床医生的个人经验，膀胱镜活检也极易受肿瘤大小和活检取材深度的影响。此外，CT或MRI对于T3b、T4期以及有淋巴结和远处转移的膀胱癌有较强分辨能力，但是对于T2～T3a期的肌层浸润性膀胱癌，诊断极为困难，同时影像学方法也受到患者憋尿的多少、炎症反应及周围组织的干扰；其中CT对膀胱癌分期的准确率为40～60％，MRI为73～86％^[1-6]。此外，有报道总结，膀胱镜检查对肌层浸润性膀胱癌的误诊率高达50％^[7]。所以影像学检查及膀胱镜联 合组织病理活检对于鉴别膀胱癌是否侵犯肌层仍存在较高的误诊率。

近几年，人们利用蛋白质组技术找出了一些膀胱癌相关的肿瘤标志物，如BLCA、Reg-1、角蛋白10、MMP2、MMP9、纤连蛋白(Fibronectin)等，并且特异性核基质蛋白22(nuclear matrix protein 22，NMP-22)等分子标志物被批准上市用于膀胱癌的辅助诊断^[8-14]。但是，这些标志物临床应用范围比较局限，主要用于膀胱癌的筛查诊断，并非用于鉴别肌层浸润性膀胱癌，并且敏感性和特异度不高，故在实际临床工作中应用得并不广泛^[15]。

由于膀胱癌的发生发展是众多分子事件共同作用的结果，而肌层非浸润与肌层浸润性膀胱癌存在明显不同的分子改变^[16]。随着医学生物学理论与技术的发展，利用肿瘤分子标志物对膀胱癌进行分子分期或分子分型，已经成为辅助膀胱癌术前诊断的研究热点。

因此，鉴定出对膀胱癌，尤其是肌层浸润性膀胱癌的诊断和预后有用的蛋白质标志物是非常重要的。

发明内容

本发明人发现，多种尿中蛋白质的含量高低，单独或组合地，能有效诊断肌层浸润性膀胱癌，或者将肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌进行区分。这些蛋白质因此可作为诊断肌层浸润性膀胱癌的有效生物标志物。

因此，本发明的一个方面在于，提供了诊断受试者中肌层浸润性膀胱癌的方法。该方法包括至少两步骤：(i)测定怀疑患有肌层浸润性膀胱癌的受试者中所述生物标志物的表达含量；及(ii)根据该生物标志物的表达含量，评估该受试者是否患有肌层浸润性膀胱癌，其中如果与未患有肌层浸润性膀胱癌的受试者中该生物标志物的表达含量或预确定的阈值相比，该生物标志物的表达含量增加则表示该受试者患有肌层浸润性膀胱癌。在一个具体的实施方案中，所述生物标志物是CYR61蛋白。

在另一个方面，本发明提供了用于对患有膀胱癌的受试者确定膀胱癌的病理分期类型或进行预后的方法。该方法包括至少两步骤：(i)测定患有膀胱癌的受试者中所述生物标志物的表达含量；及(ii)根据该生物标志物的表达含量，评估该受试者是否患有肌层浸润性膀胱癌，其中如果与患有非肌层浸润性膀胱癌的受试者中该生物标志物的表达含量或预确定的阈值相比，该生物标志物的表达含量增加则表示该受试者患有肌层浸润性膀胱癌。