[发明专利]一种博落回组织培养快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物的组织培养领域，具体涉及一种博落回组织培养快速繁殖的方法。

背景技术

博落回，学名Macleaya cordata(Willd.)，英文名Plumepoppy，罂粟科(Papaveraceae)多年生草本植物，生于山坡、路边及沟边，分布长江流域中、下游各省。博落回含有各种生物碱，有杀虫(商宝娣,王鸿雁,李正友,杨星,张效平.博落回和黄姜提取物对坏鳃指环虫的杀灭效果,贵州农业科学,2015,34(11):112-116)、抗菌(王朝元,童胜兰,胡鑫.博落回生物碱成分及其抗菌活性的研究,中南民族大学学报：自然科学版,2015,34(1):39-42)、抗癌作用，是一种具有药用价值的植物。由于博落回活性有效成分是天然物质，使用后易降解无残留，因此其作为饲料添加剂、兽药(崔志英、叶雪芳.博落回生物碱在动物养殖上的应用研究概况，广东饲料，2010，(4):26-29)、药品和化妆品的研究和应用已受到越来越多的关注。

人类利用博落回的历史渊远流长，当采集量超过博落回自然资源的再生能力时，必然会导致博落回物种濒危甚至灭绝。因此，提高博落回繁殖效率，有利于挽救和保护博落回植物种质资源，并为博落回的应用提供原料。博落回的传统繁殖方式有种子繁殖、分根繁殖。种子繁殖的周期较长，且不利于保持其优良性状。分根繁殖程序复杂，繁殖效率低，不能满足博落回药物大规模生产的原料需求。而利用组织培养技术繁殖博落回，具有保持优良性状，生产周期短，繁殖效率高、不受地区、季节及有害生物的影响等优点，是一种高效可行的植物繁殖方式。亦可借助于其他育种手段，如多倍体育种，诱变育种和体细胞杂交育种等进行多方位育种改良。

目前，中国专利申请CN103404441A公开了一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法，而中国专利申请CN103404442A公开了博落回花药离体单倍体胚胎发生及植株再生的方法，这两种博落回的组织培养繁殖方式虽然繁殖效率比种子繁殖和分根繁殖高，但是用于组织培养的外植体花药或花丝必须在开花季节采取，受到季节的限制。

发明内容

为了建立一套不受季节限制的博落回快速繁殖体系，本发明的目的在于提供一种博落回组织培养快速繁殖的方法，具体步骤如下：

将经灭菌消毒的博落回外植体先接种到愈伤组织诱导培养基上培养获得愈伤组织，再将愈伤组织接种到不定芽诱导培养基上培养获得不定芽，然后将不定芽接种到生根培养基上培养获得博落回组培苗；

所述博落回外植体为幼嫩的茎段、叶片、叶柄中的一种或多种；

所述愈伤组织诱导培养基为：以MS培养基为基本培养基，NAA(萘乙酸)的浓度为0.1-0.2mg/L、6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为1.5-2.0mg/L的培养基；

所述不定芽诱导培养基为：NAA的浓度为0.2mg/L、6-BA的浓度为1.5mg/L的培养基，或NAA的浓度为0.1mg/L、6-BA的浓度为2.0mg/L的培养基；

所述生根培养基为：以MS培养基为基本培养基，IBA(吲哚丁酸)的浓度为0.5-1.0mg/L、NAA的浓度为0.5mg/L的培养基。

所述茎段、叶柄切成0.5-lcm小段后再接种到愈伤组织诱导培养；所述叶片切成1cm²后再接种到愈伤组织诱导培养。

所述博落回外植体，优选对博落回的茎段、叶片、叶柄分别同时进行组培，以增加繁殖效率。

其中，所述灭菌消毒的具体方法为：用体积分数为0.1％的HgCl₂溶液浸泡10-12min，再用无菌水冲洗3-4次。

所述将不定芽接种到生根培养基上，所用不定芽高2-5cm。

所述愈伤组织诱导培养基优选为：以MS培养基为基本培养基，NAA的浓度为0.2mg/L、6-BA的浓度为2.0mg/L的培养基。

所述不定芽诱导培养基优选为：以MS培养基为基本培养基，NAA的浓度为0.1mg/L、6-BA的浓度为2.0mg/L的培养基。

所述生根培养基优选为：以MS培养基为基本培养基，IBA的浓度为0.5mg/L、NAA的浓度为0.5mg/L的培养基。

其中，以愈伤组织诱导培养基培养的时间为32-35天；以不定芽诱导培养基培养的时间为30-42d天；以生根培养基培养的时间为25-28d。