[发明专利]一种大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化方法

说明书

技术领域

本发明属于动物实验领域，尤其涉及一种大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导 分化方法。

背景技术

目前国内外学者采用的成脂诱导处方各不相同，庄淑波等^[1]开展相关实验采用的 成脂诱导剂为含1μmol/L的地塞米松，0.5mmol/L3-异丁甲基黄嘌呤，1mol/L人胰岛素， 1mmol/L吲哚美辛，体积分数为10％胎牛血清的诱导培养液。李胜富等^[2]诱导兔间充质干细 胞成脂分化用成脂诱导剂DMEM诱导培养基(地塞米松10-8mol/L，胰岛素10mg/L，青霉素 100U/mL，链霉素100mg/L，体积分数为10％胎牛血清，pH7.2)，表明胰岛素和地塞米松在成 脂细胞分化中起重要的作用，是其启动和促进因子。崔燎等^[3]用10-6mol/L地塞米松，6× 10-7mol/L吲哚美辛，10-4mol/L3-异丁甲基黄嘌呤来诱导骨髓间充质干细胞成脂分化。国 外学者Mauney等^[4]用0.5mmol/L3-异丁甲基黄嘌呤，1μmol/L地塞米松，50μmol/L吲哚美 辛，5μmol/L胰岛素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化。Choi等^[5]用0.5mmol/L3-异丁甲基黄 嘌呤，1μmol/L地塞米松，0.1mmol/L吲哚美辛，10μmol/L胰岛素诱导骨髓间充质干细胞成脂 分化。

但传统培养方法诱导分化率不高，且时间较长。目前，游离脂肪酸一般用于研究其 对脂肪细胞分化的影响，并未有报道将其作为脂肪诱导剂直接诱导脂肪细胞的分化。

[1]ZhuangSB，LiuY.ZhongguoMeirongYixue.2006；15(11)：1222-1224.庄淑 波，刘毅.大鼠骨髓间充质干细胞体外成脂分化能力的实验研究[J].中国美容医学，2006， 15(11)：1222-1224.

[2]LiSF，HuangDQ.ShengwuYixueGongchengxueZazhi.2003；20(2)：209- 213.李胜富，黄定强.兔骨髓间充质干细胞定向诱导分化为脂肪细胞及成骨细胞的研究 [J].生物医学工程学杂志，2003，20(2)：209-213.

[3]CuiL，LiuYY，WuT，etal.OsteogeniceffectsofD+beta-3，4- dihydroxyphenyllacticacid(salvianicacidA，SAA)onosteoblastsandbone marrowstromalcellsofintactandprednisone-treatedrats.ActaPharmacol Sin.2009；30(3)：321-332.

[4]MauneyJR，VollochV，KaplanDL.Matrix-mediatedretentionof adipogenicdifferentiationpotentialbyhumanadultbonemarrow-derived mesenchymalstemcellsduringexvivoexpansion.Biomaterials.2005；26(31)： 6167-6175.

[5]ChoiYS，ParkSN，SuhH.Adiposetissueengineeringusingmesenchymal stemcellsattachedtoinjectablePLGAspheres.Biomaterials.2005；26(29)：5855- 5863.

发明内容

本发明的目的在于提供一种大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化方法，旨 在解决传统培养方法诱导分化率不高，且时间较长的问题。

本发明是这样实现的，一种大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化方法包 括：

步骤一、选择第3代骨髓间充质干细胞，按1×10⁶mL^-1浓度接种于细胞培养瓶内，待 细胞贴壁生长至细胞密度达80％时，加入不同浓度油酸作为诱导剂；

步骤二、以基础培养基DMEM添加体积比例为10％的胎牛血清，分别添加25mM、 50mM、100mM和200mM油酸四种浓度为成脂肪细胞的诱导培养基；

步骤三、每三天换液一次，以未加诱导培养液的细胞培养瓶作为对照，3周后油红O 染色检测。