[发明专利]一种抑制EGFR基因表达的siRNA及其前体和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，，具体涉及一种抑制EGFR基因表达的siRNA及其前体和应用。

背景技术

人表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)家族是具有酪氨酸激酶活性的膜受体。EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。实验研究发现EGFR在许多人类肿瘤中有不同程度的过度表达，且已经证明EGFR与肿瘤的分化程度、恶性程度及浸润程度、放化疗敏感性、肿瘤耐药性及预后等密切相关。EGFR家族被认为是抗肿瘤治疗的理想分子靶点之一。

目前，针对EGFR的肿瘤分子靶向药物，按其性质主要分为两大类：一类是单克隆抗体，如西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗等，一类为小分子抑制剂，如吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼等，虽然上述分子靶向药物与传统化疗药物相比，分子靶向药物具有特异性强、疗效明显、副作用少等优点。但是

RNA干涉(RNAi)在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。siRNA(Small interfering RNA)，是一种小RNA分子(～21-25核苷酸)，由Dicer(RNAaseⅢ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。siRNA在RNA沉默通路中起中心作用，是对特定信使RNA(mRNA)进行降解的指导要素。其调控的机制是通过互补配对而沉默相应靶位基因的表达，所以是一种典型的负调控机制。

siRNA识别靶序列是有高度特异性的，因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生，所以这些中央的碱基位点就显得极为重要，一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应。siRNA还存在一些问题，例如：裸露的siRNA由于血清中的RNase A和极高的肾清除率导致其极易被降解，半衰期短；RNAi可能引起的脱靶效应，有研究表明，siRNA作用过程中存在非特异性，可能与靶基因之外的其他基因作用而非特异性地阻断基因表达，产生意料之外的效应。

综上所述，本领域尚需要开发一种能够调控EGFR活性或表达量的siRNA。

发明内容

本发明提供了一种新的抑制EGFR基因表达的siRNA及其前体及其在治疗肿瘤中的应用。

本发明第一方面，提供了一种前体序列，其5’至3’端具有式I所示的结构：

B1为所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括EGFR siRNA正义链序列；

B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；

C为茎环结构序列，较佳地为：GUUUUGGCCACUGACUGAC；

A1和A2分别为无，或任选的由4-5个碱基组成的RNA序列；

其中，所述EGFR siRNA正义链的核苷酸序列选自序列表中：SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:197所示序列；

在另一优选例中，所述B2与B1有2-8个碱基不互补，较佳地，所述B2与B1有3-5个碱基不互补。

在另一优选例中，所述B2较B1添加或缺失1-2个碱基。

在另一优选例中，所述的B2较B1缺失1-2个碱基，更佳地，缺失2个碱基。

在另一优选例中，所述的被缺失的1-2个碱基位于B1的中部，即9-14位中的1-2个碱基，如第9-10位，第10-11位，第11-12位，第12-13位或第13-14位。

在另一优选例中，所述的A1为UGCUG；和/或

所述的A2为CAGG或CAGGA。

在另一优选例中，A2优选为CAGG。

本发明第二方面提供一种多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成本发明第一方面中所述的前体序列。

本发明第三方面提供一种表达载体，所述的表达载体含有本发明第一方面所述的前体序列或本发明第二方面所述的多核苷酸。