[发明专利]一种抑制EGFR基因表达的siRNA及其前体和应用

权利要求书

1.一种前体序列，其特征在于，其5’至3’端具有式I所示的结构：

B1为所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括EGFR siRNA正义链序列；

B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；

C为茎环结构序列；

A1和A2分别为无，或任选的由4-5个碱基组成的RNA序列；

其中，所述EGFR siRNA正义链的核苷酸序列选自序列表中：SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:197所示序列；

其中，所示的前体序列能在宿主中加工形成EGFR siRNA。

2.如权利要求1所述的前体序列，其特征在于，所述的基本互补指所述B2与B1有2-8个碱基不互补，较佳地，所述B2与B1有3-5个碱基不互补；更佳地，所述的B2较B1缺失1-2个碱基。

3.如权利要求2所述的前体序列，其特征在于，所述的A1为UGCUG；和/或所述的A2为CAGG或CAGGA。

4.一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸能被宿主转录形成权利要求1中所述的前体序列。

5.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有权利要求1所述的前体序列或权利要求4所述的多核苷酸。

6.一种药物制剂，其特征在于，所述的制剂含有：

(a)用于表达抑制EGFR基因表达的siRNA的表达载体；以及

(b)药学上可接受的载体；

优选的，所述表达载体表达权利要求1所述的前体序列。

7.一种施用药物的方法，其特征在于，包括步骤：

将权利要求6所述的药物制剂施用于哺乳动物的第一部位，从而使得所述表达载体在所述哺乳动物体内被加工形成微粒子(microvesicle)，并被运输到所述哺乳动物的第二部位，并在所述的第二部位表达所述的siRNA。

8.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有权利要求1所述的前体序列、或权利要求5所述的表达载体，和药学上可接受的载体。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为权利要求5所述的表达载体，较佳地，为含有权利要求1所述前体序列的质粒；和/或

所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液、混悬液、乳剂、混悬剂、注射液、或粉针剂；较佳地，所述的剂型为注射剂，如静脉注射剂、腹腔注射剂。

10.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的施用方法包括：口服、呼吸道、注射、透皮、粘膜或腔道给药；较佳地，所述施用方法包括直接注射质粒。

11.一种抑制EGFR基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的正义链核苷酸序列选自序列表中：SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:197所示序列；优选地，所述siRNA的正义链核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:197所示。

12.如权利要求1所述前体序列、权利要求5所述表达载体、或权利要求11所述siRNA的用途，其特征在于，(i)用于制备EGFR的抑制剂；和/或(ii)用于制备抗EGFR高表达恶性肿瘤的药物组合物；

较佳地，所述的恶性肿瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、结直肠癌、宫颈癌、胰腺癌、前列腺癌、白血病、乳腺癌、肾癌、膀胱癌、口腔上皮癌、头颈癌、脑瘤或胶质细胞瘤。