[发明专利]转ICS1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法

权利要求书

1.一种转ICS1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用基因克隆方法获得ICS1基因；所述ICS1基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)把所述ICS1基因连接于表达调控序列，构建含ICS1基因的植物表达载体；

(3)将所述含ICS1基因的植物表达载体转化根癌农杆菌，获得含所述ICS1基因植物表达载体的根癌农杆菌菌株；

(4)利用所述含ICS1基因植物表达载体的根癌农杆菌菌株转化青蒿，获得经PCR检测的整合外源目的基因ICS1的转基因青蒿植株。

2.如权利要求1所述的转ICS1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，所述ICS1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1所述的转ICS1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，所述基因克隆方法包括以下步骤：提取青蒿基因组总RNA，将所获的青蒿基因组总RNA通过反转录酶XL反转录获得第一链cDNA，以所述第一链cDNA为模板，以上游引物和下游引物为引物对，进行PCR扩增，其中所述上游引物的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，所述下游引物的DNA序列如SEQ ID NO.4所示。

4.如权利要求1所述的转ICS1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，所述基因克隆方法包括以下步骤：提取青蒿基因组总RNA，将所获的青蒿基因组总RNA通过反转录酶XL反转录获得第一链cDNA，根据SEQ ID NO.1所示的DNA序列，设计并合成完整编码框的上游引物和下游引物，所述上游引物为SEQ ID NO.3所示的DNA序列，所述下游引物为SEQ ID NO.4所示的DNA序列，以所述的第一链cDNA为模板，以所述上游引物和所述下游引物为引物对，经PCR扩增后进行测序。

5.如权利要求1所述的转ICS1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述构建含ICS1基因的植物表达载体包括以下步骤：先构建中间载体PJET-ICS1，再酶切中间载体PJET-ICS1和表达载体pHB-n-flag，回收ICS1基因片段和pHB-n-flag载体大片段，连接转化，挑取单克隆，提取质粒做PCR检测和酶切验证，得到含ICS1基因的植物表达载体。

6.如权利要求1所述的转ICS1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述构建含ICS1基因的植物表达载体包括以下步骤：先通过连接酶将所述步骤(1)中基因克隆获得的ICS1基因片段连接到载体PJET中，得到中间载体PJET-ICS1；再设计引入酶切位点SacⅠ的上下游引物,所述引入酶切位点SacⅠ的上游引物的DNA序列如SEQ IDNO.5所示，所述引入酶切位点SacⅠ的DNA序列如SEQ ID NO.6所示，以所述中间载体PJET-ICS1为模板，以所述引入酶切位点SacⅠ的上下游引物为引物对进行PCR扩增，得产物1；再用SacⅠ酶切所述产物1和表达载体PHB-n-flag，得到带酶切位点SacⅠ的ICS1基因片段和PHB-n-flag载体大片段；回收所述带酶切位点SacⅠ的ICS1基因片段和所述PHB-n-flag载体大片段，连接转化，挑取单克隆，提取质粒做PCR检测和酶切验证，得到含ICS1基因的植物表达载体。