[发明专利]潜在EZH2小分子抑制剂及其合成方法

说明书

本发明公开了一种潜在EZH2小分子抑制剂及其合成方法。其合成方法的具体步骤如下：①将5‑巯基‑1‑苯基四氮唑和4‑氯乙酰乙酸乙酯在强碱作用下反应得到第一中间体；②将第一中间体在强碱作用下和盐酸胍反应得到第二中间体；③将第二中间体和异氰酸酯类或者异硫氰酸酯类化合物反应，生成目标化合物。本发明分离过程简单，不需要柱层析分离，步骤简单，方便进行工业化生产。本发明合成的目标化合物有很好的EZH2抑制活性，为恶性肿瘤药物的研发提供了一类新的小分子结构，这类小分子结构具有多样性，进一步的研究有助于开它的药用价值。

技术领域

本发明属于医药化工技术领域，尤其涉及EZH2小分子抑制剂及其合成方法。

背景技术

在过去的几年，表观遗传修饰，如DNA的甲基化、组蛋白的甲基化和乙酰化已经显示出对肿瘤的治疗有着良好的前景。研究发现，在血液性疾病和实体瘤中，如霍奇金病、非霍奇金瘤、前列腺癌、乳腺癌、咽喉癌，都发现了EZH2的过表达，这表明EZH2的过表达与肿瘤的产生及恶化都有着紧密的联系。因此，很多研究人员将其列为一个治疗癌症的重要靶点，开发相应的抑制剂。这几年里，已经有几个有效的药物被用作临床抗肿瘤新药,如5-氮杂胞苷,5-氮-2-脱氧胞苷，和GSK126。进一步的研究发现，组蛋白的甲基化是一个高度可逆的过程，它与多个肿瘤的发生和发展都有着紧密联系。GSK126是第一个进入临床的组蛋白甲基化抑制剂，并取得了良好的效果。所以，对于EZH2的深入研究就变得十分的必要，只有更全面的了解EZH2的结构和生物功能，才能开发出更多高效、高选择性的抑制剂，为恶性肿瘤的治疗带来新的希望。

在对PRC2的研究更加的深入后，几种潜在的EZH2抑制剂正逐渐出现在人们的视野中。这些抑制剂中，DZNep可以通过和H3K27me3相互作用来抑制EZH2的表达，这样通过间接的作用就可以达到使肿瘤细胞被抑制的目的。DZNep干扰S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶的新陈代谢，这样就降低了细胞的生存时间和能力，进而间接的抑制甲基化反应。DZNep诱导细胞凋亡能力与抑制PRC2的途径有着紧密的关系，虽然确切的机制尚未能够研究清楚。此外，已有文献报道，DZNep和组蛋白去乙酰酶抑制剂是互相作用的。同时，它还与激活沉默基因的DNA甲基转移酶抑制剂相互协作。作为一个抗病毒化合物,DZNep在人体内的毒性很小。同时，它在癌细胞的表观遗传途径中也有着很重要的作用，所以它可能是一种有前景的抗癌候选药物。

在过去几年里的测试，发现这些小分子有很好的选择性，并且对特定细胞的抑制活性也很高。不像其他类的一些小分子，同时对很多的细胞都有抑制的效果，没有很好的选择性，达不到杀死特定恶性肿瘤细胞的目的。近期，通过研究发现，淋巴瘤中的EZH2都是高度表达的,所以要抑制住EZH2的过表达,这样可以使淋巴瘤不会继续的增殖和恶化。研究人员在前列腺癌和骨髓癌中也观察到EZH2发生了突变和失活。为此，研究人员开发了一些抑制剂,它可以与酶蛋白相互作用,占用SAM的结合位点,再来和SAM竞争,这样EZH2的高表达就可以得到有效的抑制,通过这个理念，从而开发出有效的高选择性竞争性抑制剂。

通过PRC2复合物的高通量生物筛选实验，来确定EZH2甲基转移酶的活性。几个有潜力的抑制小分子已经被筛选出来。虽然活性位点的结构还没有确定，但保守域SET结构显示了两个基本的结合口袋：一个是用于SAM的甲基供体，另一个是用于Lys27的基质。在人体中已经发现了50多个SET结构域蛋白，所以抑制剂对EZH2中的SET结构域的选择变得很重要。

在2012年年底,几个SAM的竞争型抑制剂已经被发现,化合物EPZOO5687对EZH2的选择性与另外的15个PMTs相比,超过500倍。EPZ005687还可以抑制EZH2上的Y641和A677突变引起的H3K27甲基化，发现该化合物可以有选择性的杀死由EZH2突变引起的淋巴瘤细胞。