[发明专利]一种红霉素的合成调控基因phoP及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种红霉素的合成调控基因phoP，其特征在于，所述合成调控基因phoP的核苷酸序列选自下列三种中的一种：

(1)序列表中的序列SEQIDNO:1；

(2)与SEQIDNO:1所示核苷酸编码相同蛋白的核苷酸序列，所述编码相同蛋白的序列为SEQIDNO:2所示；

(3)编码将SEQIDNO:2蛋白经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与SEQIDNO:2相同功能的蛋白突变体的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的合成调控基因phoP的制备方法，其特征在于，所述合成调控基因phoP来源于放线菌，通过过表达红霉糖多孢菌基因组中的phoP基因，得到突变菌。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述phoP基因的过表达通过重组整合插入基因组内的方法实现。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括双交换同源重组基因敲除的方法，步骤如下：

1)在过表达质粒pIB139的MCS内插入预过表达基因phoP的CDS基因编码序列，得到phoP基因过表达的pIB139-phoP质粒；

2)将phoP基因过表达的质粒pIB139-phoP质粒通过原生质体转化方法导入到预先制备的红霉糖多孢菌野生株原生质体中，得到phoP基因过表达的突变菌；

3)在含安普霉素抗性平板上筛选突变菌，并通过PCR和RT-PCR的方法验证突变菌。

5.权利要求1所述的合成调控基因phoP的应用，其特征在于，所述合成调控基因phoP用于正向调控红霉素的生物合成。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述正向调控是通过基因工程手段提高红霉糖多孢菌phoP基因或同源基因的转录表达水平，提高红霉素合成产率。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述红霉糖多孢菌是红霉素合成菌。

8.权利要求1所述的合成调控基因phoP的应用，其特征在于，通过敲除所述合成调控基因phoP的phoP基因得到突变株。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述突变株用于调控红霉素产量。