[发明专利]扩增乳腺癌与卵巢癌相关基因的引物、试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物基因技术领域，特别涉及一种扩增乳腺癌与卵巢癌相关基因的引物，还涉及所述扩增乳腺癌与卵巢癌相关基因的试剂盒及应用。

背景技术

由于环境恶化和人口老龄化等因素，癌症发生率持续上升成为新世纪人类“头号杀手”，在我国癌症已成为居民死因的首位。目前已知遗传因素对肿瘤的发生以及放疗、化疗和个体化治疗起重要作用。肿瘤的发生一方面受到致癌基因调节，另一方面受到抑制肿瘤基因的调节。无论是手术治疗还是放化疗，除部分患者能获得预期效果外，多数处于进展期的实体肿瘤病人预后不良。临床上如能早期诊断发现，多数患者可实现长期生存；对于已处进展期的患者，精准的个体化医疗可实现较理想的预后，这些都需依赖于基因诊断技术。然而，受到现有临床基因检测技术种种缺陷的制约，癌症基因诊断技术的推广较为缓慢。

近年来乳腺癌和卵巢癌的发病率呈明显上升的趋势。与此同时，肿瘤基因检测对选择特异化疗药物、进行个体化精准治疗具有重要意义并已取得很大进展。截止2015年，美国食品药品监督管理局要求100多种药物的标签中必须注明药物遗传学信息，其中包括20多个与癌症相关的基因。与乳腺癌和卵巢癌发病相关的BRCA1等基因的一些突变位点也开始作为检验指标用于预防和治疗乳腺癌和卵巢癌的发生，大量基因突变检测试剂盒也用于临床，然而它们检测的一致性、灵敏度及准确度尚有待验证。目前常用基因突变检测方法主要有直接测序法、限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)、单链构象多态性分析(Single-strandconformationpolymorphismanalysis，SSCP)、焦磷酸测序法(Pyrosequencing)、高分辨率熔解曲线法(highresolutionmeltingcurveanalysis，HRM)、扩增阻碍突变系统法(amplificationrefractorymutationsystem，ARMS)等6种方法，各有其优缺点。迄今为止，美国FDA已通过了8个药物遗传学相关的体外诊断产品的质量认证，这仅占美国FDA推荐检测基因的17.6％。但是目前与药物遗传学相关基因缺少标准的检测方法和质量控制，同时，现有的检测方法与试剂盒还存在检测基因覆盖范围窄、测序片段长度小，对标本质量要求高、检测准确度不高和费用昂贵的缺点，这些均制约了个体化治疗基因检测的发展及推广。

随着深度测序与二代测序技术(NGS)的发展与应用，肿瘤基因测序的片段长度与覆盖范围大大增加。二代测序技术使高通量DNA测序效率提高五十万倍以上使得快速高效基因检测成为可能，但市面上尚缺乏针对乳腺癌和卵巢癌的快速、简便、灵敏度高、特异性强且测序覆盖范围广的基因检测方法。

总之，目前世界上还没有针对乳腺癌和卵巢癌能够同时分析BRCA1、BRCA2、TP53、PIK3CA、EGFR、KRAS、BRAF共7个关键基因，实现快速、简便、全面精准基因检测的方法。

发明内容

为了解决以上现有技术中针对乳腺癌和卵巢癌关键基因分析中存在的不够全面、简便的问题，本申请提供了扩增乳腺癌与卵巢癌相关基因的引物，建立了对BRCA1、BRCA2、TP53、PIK3CA、EGFR、KRAS、BRAF共7个乳腺癌与卵巢癌相关基因的全部外显子进行扩增的技术。

并以此研发了扩增上述7个基因的试剂盒。

还涉及所述扩增乳腺癌与卵巢癌相关基因的试剂盒在扩增乳腺癌与卵巢癌相关基因中的应用。

本发明是通过以下步骤得到的：

扩增乳腺癌与卵巢癌相关基因的引物，

扩增BRCA1的上游引物见序列表中序列1，

扩增BRCA1的下游引物见序列表中序列2，

扩增BRCA2的上游引物见序列表中序列3，

扩增BRCA2的下游引物见序列表中序列4，

扩增TP53的上游引物见序列表中序列5、7和9，

扩增TP53的下游引物见序列表中序列6、8和10，

扩增PIK3CA的上游引物见序列表中序列11、13、15、17、19、21和23，

扩增PIK3CA的下游引物见序列表中序列12、14、16、18、20、22和24，

扩增EGFR的上游引物见序列表中序列25、27和29，

扩增EGFR的下游引物见序列表中序列26、28和30，

扩增KRAS的上游引物见序列表中序列31和33，

扩增KRAS的下游引物见序列表中序列32和34，

扩增BRAF的上游引物见序列表中序列35，