[发明专利]一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法

说明书

技术领域

本发明属于海藻良种培育技术领域，具体涉及一种紫外线诱变培育海带品系的方法。

背景技术

海带是具异型世代交替的大型经济褐藻，其生活史包括短期的配子体和长期的孢子体阶段，成熟海带孢子体放散产生游孢子，游孢子附着后发育为雌、雄配子体，而配子体分别产生精卵，卵子受精形成合子，合子发育为幼孢子体。

我国从50年代开始进行海带养殖，目前海带养殖业是我国海水养殖业的支柱产业，海带品种选育技术也得到较大发展，射线诱变育种也应用过，在上个世纪科研人员利用X射线诱变培育了“1170”海带，还有研究He-Ne激光和紫外线对海带雌配子体的影响的报道，但这种办法应用很少，主要原因在于诱变率低，导致筛选成本高，针对这个问题，本专利提供一种方法解决这个问题。

发明内容

本发明提供一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法，目的在于提高海带诱变率，使海带产生的遗传变异个体增多，从而有效提高筛选的效率。

本发明的方法，包括如下的步骤：

1)准备诱变种质材料

选择作为诱变亲本的海带，分离海带配子体；并将配子体进行扩增培养；

2)诱变前处理

收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体，培养的光照强度为2500lx，温度为10℃；

3)诱变处理

在诱变处理前7d，将雌、雄配子体粉碎至5-10个细胞段，将雌、雄配子体用双层500目筛绢过滤，使配子体留在筛绢上，再用灭菌海水洗到相应容器中，加入苗帘，再加入1cm深的海水，置于8-12℃的环境中，进行紫外辐射；辐射光源的功率是波长15W紫外线灯管2支，灯管距离海水表面30cm，照射时间为40s；照射完毕再往容器内加入培养液，盖上盖并用黑纸包好，24小时后将雌、雄配子体混合泼洒在苗帘上继续培养；培养条件为：光照2500lx，光周期12h；温度10℃；海水中加NaNO₃和KH₂PO₄，添加浓度为N-4mg/L，P-0.4mg/L；

待有合子形成，则将苗帘的水倒掉，加入预冷消毒海水使苗帘保持湿润状态，采用上述辐射条件再进行紫外照射，24h后重复操作一次；

4)诱变苗种的养殖

把步骤3)中筛选的苗帘进行培育，培育条件为：光照为2000-2500lx，温度为8-12℃，每3天换三分之一低温灭菌海水；待发育至8列细胞以上的幼孢子体时，进行流水培育；最后转移至海上养殖；再进行性状检测筛选突变体。

所述的性状包括有：

1)表观性状检测：每2个月检测1次全部海带性状，包括长度、宽度、中带部宽和厚度，与养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10％的海带个体；

2)品质性状检测：在海带成熟期，取梢部部分藻体，测定褐藻胶、甘露醇和碘等品质性状指标，与养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10％的海带个体。

本发明利用紫外线对海带父母本的配子体和合子阶段进行诱变，使诱变的海带在低剂量紫外照射的情况下获得最大的突变率，从而获得产生突变的个体。

具体实施方式

海带的生活史有明显的世代交替，包括长期的孢子体和短期的配子体世代，两者差别很大，孢子体大而有组织的分化，配子体只有十几个细胞。孢子体成熟时，产生很多游动孢子。游孢子附着12-14d后萌发为雌、雄配子体。雌配子体成熟时卵排出，卵在母体外受精，形成二倍的合子。合子几日后即萌发为新的海带。下面就实施例对发明内容做具体描述。

实施例1：诱变条件的筛选

所做实验分为3组，分别是未作紫外辐射组、只辐射配子体组和按照本方法处理组。

1、材料

1)种质材料准备

选择长海带和真海带分别作为父本和母本，记录海带父本和母本数量特征，包括长度、宽度、厚度、中带部宽，以及藻体外形特征，包括梢部形状、基部形状以及藻体颜色等。选用专利(ZL 2013 1 0225745.3)的方法分离海带种质并分雌、雄单独培养，使其营养生长。

待长到0.1g左右，进行扩增培养至实验所需要的量，其条件是：0.10g的起始重量、用组织粉碎机粉碎后，经300目筛绢过滤，放入1L锥形瓶中，锥形瓶内加入800ml的消毒海水，海水中加NaNO₃和KH₂PO₄，添加浓度为N-10mg/L，P-1mg/L。光照周期为12h，强度为2000lx。

水温14℃。