[发明专利]一种海洋小单孢菌发酵生产Rakicidins类化合物的方法

权利要求书

1.一种发酵生产Rakicidins类化合物的方法，包括：将保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.12132的小单孢菌(Micromonospora sp)进行固体斜面培养、摇瓶种子培养、种子罐培养、发酵罐发酵培养，后处理即得，其特征是：发酵培养基的组分及各组分的重量百分含量为：可溶性淀粉3～6、蔗糖0.5～2.0、黄豆饼粉1.0～3.0、酵母粉1.0～3.0、MgSO₄·7H₂O 0.04、FeSO₄·7H₂O 0.005、CuSO₄·5H₂O 0.005、CoCl₂·6H₂O 0.0005、CaCO₃ 0.3～0.6，自来水配制，pH 7.5，且在发酵罐发酵开始阶段就补加氨基酸，所述的Rakicidins类化合物选自下列任一结构的化合物：

2.根据权利要求1的方法，其中所述补加的氨基酸选自缬氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸中的一种或几种。

3.根据权利要求2的方法，其中添加缬氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸的浓度分别至0.05～0.3％、0.05～0.3％、0.05～0.3％，均为重量百分比。

4.根据权利要求1的方法，包括：

a.固体斜面培养：保藏编号为CGMCC NO.12132的小单孢菌接种于固体斜面，后于30-37℃恒温培养10-15天，后常温保藏；

b.摇瓶种子培养：在500ml三角瓶中装入种子培养基80ml，121℃消毒30分钟，冷却后接种孢子悬液，于摇床230rpm，28-35℃培养48小时；

c.种子罐培养：将摇瓶培养好的种子合并，以种子罐装液量的1-5％接种到种子罐培养基中，200-300rpm，通气量1:1vvm，28℃，培养48小时；

d.发酵罐发酵培养：将种子罐培养好的种子以5-10％的接种量接种到发酵罐中，培养时间为72-100小时，发酵转速控制200-400rpm、通气量控制0.08-1.2vvm，在发酵过程中添加缬氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸中的一种或几种作为发酵的前体物。

e.后处理，即得。

5.根据权利要求4的方法，其中缬氨酸浓度为0.05-0.3％、甘氨酸浓度为0.05-0.3％、甲硫氨酸浓度为0.05-0.3％。

6.根据权利要求4的方法，其中摇瓶种子培养步骤中种子培养基的组分及各组分的重量百分含量为：可溶性淀粉1～3、葡萄糖0.5～1.0、酵母粉1～2、蛋白胨0.5～2.0、MgSO₄·7H₂O 0.05、FeSO₄·7H₂O 0.005、CuSO₄·5H₂O 0.005、CoCl₂·6H₂O 0.0005、CaCO₃ 0.1～0.3，自来水配制，pH,7.0～7.5。

7.根据权利要求4的方法，其中后处理方法包括：取发酵液加入甲醇混合均匀，超声波处理后10000rpm离心，取清液于0.45um膜过滤后用于测定发酵液各组分效价。