[发明专利]一种提取檀香木材组织总RNA的方法

权利要求书

1.一种提取檀香木材组织总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

取檀香木材组织磨成粉末后，加入到异硫氰酸胍提取液中，冰浴后离心，取上清在其中 加入SDS缓冲液后混匀，然后再加入水饱和酚/氯仿/异戊醇混匀，离心，取上清在其中再加 入氯仿混匀，离心，取上清在其中加入无水乙醇和醋酸钠溶液沉淀RNA，离心去上清取沉淀， 再经乙醇洗涤后，得总RNA。

2.根据权利要求1所述的提取檀香木材组织总RNA的方法，其特征在于，所述的异硫氰酸 胍提取液为：每升含有4mol异硫氰酸胍，2mmolTris-HCl，10mlβ-巯基乙醇，pH＝8.0； 所述的SDS缓冲液为每升含有2gSDS、100mmolNaCl，50mmolTris-HCl，10mmolEDTA， pH＝8.0；所述的水饱和酚/氯仿/异戊醇为由水饱和酚、氯仿和异戊醇按照体积比25∶24∶1 混合而成；所述的醋酸钠溶液为3mol/L的醋酸钠溶液，pH＝5.2。

3.根据权利要求2所述的提取檀香木材组织总RNA的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)取檀香木材组织在液氮中磨成粉末，转入冰浴的、盛有足量异硫氰酸胍提取液的离 心管中，旋涡混匀，冰浴15min，4℃、12000r/min离心15min；

(2)将上清液转入新的离心管中，加入SDS缓冲液，振荡混匀，再加入等体积的水饱 和酚/氯仿/异戊醇，旋涡混匀，4℃、12000r/min离心20min；

(3)将上清液转入新离心管中，加入等体积氯仿，振荡混匀，4℃、12000r/min离心20 min；

(4)将上清液转入新离心管中，加入2倍体积的无水乙醇和0.1倍体积的3mol/L、pH5.2 的醋酸钠溶液，-20℃静置2h以上，4℃、12000r/min离心20min；

(5)弃上清液，将沉淀用体积分数75％的乙醇冲洗1～2次，4℃、12000r/m离心15min， 弃上清，晾干沉淀，沉淀即为檀香木材组织总RNA，再用DEPC水充分溶解后保存。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)的足量异硫氰酸胍提取液是 指每1g檀香木材组织粉末至少需要1.5mL异硫氰酸胍提取液。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(5)的晾干沉淀前先短暂离心， 再把残余的乙醇用移液枪吸走。