[发明专利]一种流感病毒分离无血清培养基及其用途和制备

说明书

技术领域

本发明涉及生物、医学领域，具体地是涉及一种流感病毒分离无血清培养基及其用途和制备。

背景技术

流行性感冒(简称流感)是流感病毒引起的急性呼吸道感染，也是一种传染性强、传播速度快的疾病。其主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。典型的临床症状是：急起高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状。一般秋冬季节是其高发期，所引起的并发症和死亡现象非常严重。该病是由流感病毒引起，可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，甲型病毒经常发生抗原变异，传染性大，传播迅速，极易发生大范围流行。甲型H1N1也就是甲型一种。本病具有自限性，但在婴幼儿、老年人和存在心肺基础疾病的患者容易并发肺炎等严重并发症而导致死亡。乙型流感病毒的抗原变异较小，通常只引起流感的局部爆发。丙型流感病毒的抗原稳定，且致病力较弱，主要侵犯幼儿和免疫力低下的人群。

流感病毒传染性强，传播快，易造成大流行，接种疫苗可明显降低发病率和减轻症状。但由于流感病毒不断发生变异，只有经常掌握流感病毒变异的动态，选育新流行病毒株，才能及时制备出有特异性预防作用的疫苗。

目前流感疫苗制备时首先需要获得大量的流感病毒，病毒的获取最常见的就是组织培养，可用于流感疫苗制备的细胞系包括：人胚肾细胞、鸡胚肾细胞、MDCK细胞。一般的培养方法如下：

i)在培养基中增殖细胞；

ii)用流感病毒感染这些细胞；

iii)继续培养，分离在细胞中复制的病毒。

传统的第iii)步骤中细胞培养大多采用DMEM或MEM加BSA和HEPES培养方式，在第i)步骤中细胞增殖阶段使用了胎牛血清，残留的血清会干扰第ii)步骤中病毒感染细胞。血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种复杂混合物，其含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以有效地促进细胞生长和产物表达。然而，血清的应用也存在许多问题：血清中已知的组分能干扰流感病毒感染细胞，使病毒分离困难，同时血清易受病毒、支原体或其他病原体的污染；批间差异造成产品批次间的质量难以严格控制。

鉴于流感是至今尚无法完全加以控制的一种重要病毒性急性呼吸道传染病，因此，及时的分离出流感毒株，特变是有代表意义的毒株，可以预测流感的发生和流行，为制备流感疫苗和诊断试剂提供毒株，在第iii)步中，现有的不含血清的培养基培养MDCK细胞，分离和收获病毒的周期较长，获得的病毒滴度低，难以满足快速获得毒株的需要。

本发明就是在此基础上研究获得的能够克服上述缺陷的培养基。

发明内容

本发明将提供一种维持MDCK细胞生长，分离和收获病毒周期短的培养基。

本发明提供一种流感病毒分离无血清培养基，其特征在于包括如下成分：甘氨酸、L-精氨酸盐酸盐、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸盐酸盐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、对氨基苯甲酸、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺素盐酸盐、维生素B12、肌醇、硝酸钙(4水)、硫酸镁(7水)、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸氢二钠、葡萄糖、还原型谷胱甘肽(还原型)、HEPES、酚红钠盐。

进一步，其还包括如下成分：硫酸铜(5水)、硝酸铁(9水)、硫酸亚铁(7水)、氯化镁(无水)、硫酸锌(7水)、磷酸二氢钠(1水)、丙酮酸钠、腐胺盐酸盐、白蛋白。