[发明专利]一种哺乳动物细胞无血清培养基

说明书

本发明提供了一种哺乳动物细胞无血清培养基，它是由基础细胞培养基和添加物组成。本发明还提供了该无血清培养基的用途。本发明的无血清培养基，适合哺乳动物细胞生长和产物表达，而且成分明确、生产成本较低，工业应用前景良好。

技术领域

本发明属于哺乳动物细胞培养领域，涉及一种哺乳动物细胞无血清培养基及其用途。

背景技术

体外培养动物细胞时，通常需要在培养基中加入血清，用于提供细胞生长所需的营养物质及生长环境，但血清存在价格昂贵、极易感染病毒或支原体、成分复杂不利于进行细胞产品的分离纯化等诸多缺点。随着现代生物技术的发展，科学家们开始寻求一种新的替代培养基——无血清培养基。

无血清培养基(Serum Free Medium,SFM)，是指在基础细胞培养基基础上，添加成分完全确定或部分确定的血清替代成分形成的培养基，适合大规模生产，被广泛应用于细胞生物学、药理学、肿瘤学领域。

中国仓鼠卵巢细胞，又称CHO细胞(Chinese hamster ovary)，具有不死性，可以传代百代以上，在生物工程上被广泛作为外源基因的宿主，用于基因工程制药。为了商业化生产蛋白药物，开发成分明确、能够有效提高细胞密度和蛋白表达量的CHO细胞无血清培养基非常必要。

目前已有CHO细胞用的无血清培养基报道，例如公告号为CN1696283A的专利公开了一种用于CHO细胞培养的无血清培养基，但培养基中的胰岛素等动物蛋白含量较高，无血清培养基的配制成本高、后期产物纯化的难度增加。国际上也有商业化的无血清培养基，但其价格高昂，且配方保密，生产成本高。

因此，开发成分明确、价格低廉的CHO细胞无血清培养基对实现CHO细胞工业化生产具有重要的实际意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种成分明确、价格低廉，能够有效提高细胞密度和蛋白表达量的无血清培养基。

本发明提供了一种哺乳动物细胞无血清培养基，它是由基础细胞培养基和添加物组成，所述添加物为乙醇胺、丁酸钠、转铁蛋白、维生素、氨基酸和微量元素；所述乙醇胺的终浓度为9.88-10.12mg/L，所述丁酸钠的终浓度为9.73-10.27mg/L，所述转铁蛋白的终浓度为1.86-2.14mg/L。

基础细胞培养基：指仅能维持细胞生存基本营养需求的培养基，例如RPMI1640、DMEM/F12、M199培养基。

其中，所述维生素是终浓度为0.2mg/L的生物素、2.46-2.71mg/L的叶酸、0.25-0.35mg/L的核黄素、2.18-2.36mg/L的泛酸钙、8.77-9.14mg/L的氯化胆碱、12.39-12.81mg/L的肌醇、1.92-2.12mg/L的烟酰胺、0.88-1.12mg/L的维生素B6以及0.56-0.80mg/L的维生素B12。

其中，所述氨基酸是终浓度为13.5-16.5mg/L的甘氨酸、8.6-11.4mg/L的L-丙氨酸、38-42mg/L的L-谷氨酸、95-105mg/L的L-谷氨酰胺、28-32mg/L的L-精氨酸、37-43mg/L的L-组氨酸、36-44mg/L的L-亮氨酸、57-63mg/L的L-异亮氨酸、68-72mg/L的L-丝氨酸、76-84mg/L的L-苏氨酸、38-42mg/L的L-酪氨酸、57-63mg/L的L-赖氨酸、56-64mg/L的L-蛋氨酸、68-72mg/L的L-苯丙氨酸、37-43mg/L的L-脯氨酸、67-73mg/L的L-色氨酸、68-72mg/L的L-缬氨酸、26-34mg/L的L-天冬氨酸以及55-65mg/L的L-天冬酰胺。