[发明专利]一种针对沙门氏菌的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，进一步涉及基于ELISA的抗原检测技术，具体涉及一种针对沙门氏菌的检测方法。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)为革兰氏阴性短杆菌，无荚膜和芽孢，大部分属于需氧，小部分兼性厌氧菌，有鞭毛；生长温度范围广，可在10-42℃条件下生长，最适温度为37℃，最佳pH6.8-7.8；沙门氏菌分布广，是引起食物中毒的重要病原菌，很容易在动物与动物、动物与人、人与人之间通过直接或间接的途径传播，没无中间宿主，能引起人和动物伤寒、副伤寒和食物中毒，导致肠热症、败血症和胃肠炎三类疾病。近年来，由于环境污染的加剧及食品生产流通的全球化，食品在从原材料到生产、运输、销售的各个环节都极易受到细菌污染，造成细菌性食物中毒，每年由沙门氏菌引起的食物中毒病例多达几千万，造成很大的健康危害和经济损失。在各类细菌性的食物中毒中,沙门氏菌食物中毒位居前列。在我国，沙门氏菌引起的食物中毒占首位，沙门氏菌食物中毒和动物感染沙门氏菌十分严重，已引起各界学者的广泛重视。

现有技术中，检测沙门氏菌常用方法包括传统检测方法、以分子生物学为基础的检测方法以及免疫学为基础的检测方法三大类。常用传统检测方法需要预增菌，选择性增菌，分离培养以及生化鉴定四个步骤。其结果准确、可靠的，但需经过预增菌以及生化试验等一系列复杂繁琐的操作，检测周期一般需要4-7天才能完成。因此，传统的检测技术已无法满足对食品中沙门氏菌的快速检出。以分子生物学为基础的检测方法包括核酸探针技术，PCR技术以及基因芯片技术等技术；尽管该类方法具有灵敏度高等特点，但需依赖于昂贵的仪器设备和熟练的操作人员，且需复杂的样品前处理，因此无法满足基层及现场实地监控的需要。免疫学方法主要包括直接免疫荧光(IFA)法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫磁性分离(IMS)、乳胶凝集试验等，该类方法基于免疫学的快速筛查，具有通量高、检测快速、价格便宜等优势，近年来得到了大量的推广和应用。特别是，酶联免疫吸附法(ELISA)方法因具有快速、灵敏、特异、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备，且对样品纯度要求不高，特别适用于大批量样品的检测等优点，已成为沙门氏菌快速筛查检测的主要方法。然而，现有技术中检测沙门氏菌的ELISA方法普遍基于辣根过氧化物酶标记的抗体或抗原催化双氧水生成羟自由基，进而氧化无色的化学显色底物四甲基联苯二胺(TMB)形成蓝色产物，然后使用终止液(2M H₂SO₄)终止反应形成黄色溶液于450nm处记录吸光度值。该类方法因其显色强度较低，因此检测灵敏度相对较低，当待测样品中目标物含量较低时易出现假阴性结果，从而无法满足实际应用的要求。

近年来，一些新型的信号传导机制被报道用于替代传统ELISA的信号传导机制用于提高ELISA的灵敏度，如放射免疫分析底物、化学发光底物、荧光底物以及共振胶体金溶液等。然而，发光体系的构建需要充分考虑被检测对象的分子生物学性质，例如在方法层面，抗体的包被及其与抗原的结合性能，选用何种标记物酶及其与抗体的偶联方法，显色底物的选择以及具体发光方法；在效果层面，既要保证显色反应的灵敏性，又应满足显色强度与目标物含量的线性关系。因此，针对沙门氏菌的ELISA检测方法，尤其以提升其检测灵敏性为目的的方法改进，具有突出的技术难度。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种针对沙门氏菌的检测方法，以解决现有技术的沙门氏菌ELISA检测方法精度较低。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术用于沙门氏菌抗原检测的ELISA方法中，标记抗体的酶灵敏性较低。

本发明要解决的再一技术问题是现有技术用于沙门氏菌抗原检测的ELISA方法中，显色系统灵敏性较低。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶对沙门氏菌抗原执行ELISA检测时，具体工艺方法并不明确。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶、采用双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点作为底物对沙门氏菌抗原执行ELISA检测时，检测结果与抗原浓度的线性关系不佳。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶、采用双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点作为底物对沙门氏菌抗原执行ELISA检测时，过程中洗涤效果不佳。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：