[发明专利]一种玉米赤霉烯酮降解酶基因及高产菌株有效
| 申请号： | 201610156145.X | 申请日： | 2016-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN105755023B | 公开（公告）日： | 2020-03-31 |
| 发明（设计）人： | 张桂敏;向腊;周玉玲;马延和 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12Q1/44;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 杨立 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 玉米 赤霉烯酮 降解 基因 高产 菌株 | ||
【权利要求书】：
1.一种高产菌株，其特征在于，包括重组载体，所述高产菌株为重组毕赤酵母菌株，所述重组载体包括AOX1启动子、信号肽和玉米赤霉烯酮降解酶基因，所述玉米赤霉烯酮降解酶基因如SEQ ID NO.1所示，所述玉米赤霉烯酮降解酶基因以三个拷贝的形式存在。
2.一种生产玉米赤霉烯酮降解酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：培养权利要求1所述的高产菌株，并由培养产物中收集玉米赤霉烯酮降解酶，包括以下步骤：
1)挑取权利要求1所述高产菌株的单菌落接种至YPD培养基中，28℃条件下培养48h，得到种子培养液；
2)以初始发酵体积10%的接种量将种子培养液接种于基础盐培养基中，发酵温度为25℃，pH为6.0，控制溶氧在20-30%之间；
3)当溶氧迅速上升至60%时，开始流加体积分数为50%的甘油,并控制溶氧在20-30%之间；当菌体密度OD600达到300左右时，停止补加甘油，溶氧上升至60%并维持30min，之后进入步骤4)；
4)降低温度至22℃，补加酵母粉至终浓度为7wt%-15wt%，然后流加甲醇诱导玉米赤霉烯酮降解酶的表达，并控制溶氧在20%-30%之间。
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