[发明专利]一种氨酸酶抑制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种氨酸酶抑制剂的制备方法，属于氨酸酶抑制剂制备技术领域。

背景技术

酪氨酸酶又称酚氧化酶、多酚氧化酶、儿茶酚氧化酶，是结构复杂的多亚基的含铜氧化还原酶，广泛存在于微生物、动植物及人体中。它是生物体内催化黑色素生成的关键限速酶，而且与果蔬褐化、人体色素沉着性疾病(如雀斑、黄褐斑、老年斑等)及黑色素瘤的发生与治疗有重要关系。酪氨酸酶抑制剂可通过抑制酪氨酸酶的活性来切断黑色素的生物合成反应链，以此达到阻碍黑色素生成、防止果蔬褐变等目的。目前酪氨酸酶抑制剂已广泛应用于美白护肤化妆品、害虫调控剂以及食品添加剂等各个方面。因此，对医药、化妆品和食品工业等多个领域而言，酪氨酸酶抑制成分的研究与开发均具有广阔的应用前景。

酪氨酸酶抑制剂可以抑制酪氨酸酶的活性，从而降低酪氨酸酶引起的不利影响。到目前为止，人们从低等菌类到高等植物中发现了许多天然酪氨酸酶抑制剂，如曲酸和壬二酸；从高等植物中获得的酪氨酸酶抑制剂多数属于多酚类物质，主要分为黄酮类和二苯乙烯类。

当前，酪氨酸酶抑制剂的来源以有机合成、商品化合物筛选以及天然植物或微生物次级代谢产物的分离提取三个途径为主；化学合成产物具有毒副作用强、成本较高、操作难度大等弊端，寻求天然来源的酪氨酸酶抑制剂仍然是引起食品科学家和药物化学家高度兴趣的研究课题，但是从天然植物中虽然可以提取得到一些具有很强活性的酪氨酸酶制剂，但是由于它几乎不溶或难溶于水等缺点，难于广泛得到应用。

发明内容

本发明主要解决的技术问题：针对目前传统化学合成法合成酪氨酸酶抑制剂时毒副作用强，成本高，操作难度大，而天然植物分离提取虽可以得到具有很强活性的酪氨酸酶制剂，无毒副作用，但是由于其几乎不溶或难溶于水，难于广泛得到应用的现状，提供了一种将茶叶籽粕脱脂后利用乙醇提取，并将提取物与餐后废气食用油混合，每天淋洗风干后的茶果皮，使得茶果皮长菌，之后再用双氧水对长菌的茶果皮进行灭菌，最后将灭菌后出现黑色霉菌的茶果皮再次利用乙醇水溶液进行提取，提取液浓缩后，即可得到氨酸酶抑制剂的制备方法。该方法操作简单易行，原料天然易得，不仅制得的氨酸酶抑制剂活性强，IC₅₀值为42.5μg/mL，而且大大提高了氨酸酶抑制剂的提取效率，增强了氨酸酶抑制剂的溶解性和有效性，用于美白化妆品、预防和治疗人体黑色素过多导致的沉着性疾病，具有极好的商业前景。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

（1）称取500～1000g茶果皮，放入清水中反复冲洗，去除表面残留污物后，倒入钢筛中，在阳光下暴晒，直至完全晒干为止，备用；

（2）称取100～150g茶叶籽粕，放入粉碎机中，粉碎后过100～105目筛，得茶叶籽粕粉末，置于2L的烧杯中，并向烧杯中以20～30mL/min的速率滴加正乙烷，滴加22～25min后停止滴加，在30～45℃下浸提1～1.5h，待浸提结束，将浸提物取出移入高速离心机中，在1200～1500r/min的转速下离心处理15～20min，去液留渣，置于烘箱中，在105～110℃下烘干至恒重；

（3）将上述烘干至恒重后的茶叶籽粕渣放入1L的烧杯中，并向其中加入500～600mL质量浓度为85％的乙醇溶液，混合均匀后，放置在超声振荡仪中，在超声频率为25～28KHz，超声功率为100～120W下振荡反应1～2h，待反应结束，过滤去渣，得到滤液，之后将得到的滤液放入索式抽提器中，抽提40～50min，收集滤液抽提液，随后将得到的滤液抽提液移入蒸馏装置，在65～75℃下加热30～35min，蒸馏去除乙醇，得到茶叶籽粕提取液；

（4）在上述得到的茶叶籽粕提取液中加入茶叶籽粕提取物质量1～2倍的餐厅废弃食用油，充分搅拌均匀，调节pH值为5.5～6.2后，每隔一天对上述步骤（1）晒干的茶果皮进行淋洗，淋洗3～5天，使得茶果皮变质长出霉菌，随后再次调节淋洗液pH值为5.7～6.3，每隔3h对已变质长出霉菌的茶果皮进行淋洗，直至茶果皮表面生长出3～5cm的白色菌丝时，停止淋洗，选取质量浓度为30％的双氧水对长出的白色菌丝进行均匀喷洒，每天喷洒3～5次，直至白色菌丝完全消失，出现黑色霉菌；