[发明专利]一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法

说明书

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生榛蘑里提取纯化紫杉醇的方法，特别是涉及一种利用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法。本发明优点：1、超高压提取在常温进行，营养成分破坏少，提取迅速。2、生物酶解温度低，且采用等离子液体做为溶剂，紫杉醇有效成分含量大为提高，高达99.7％。3、采用高速逆流色谱技术纯化，克服了常规技术获得紫杉醇时间较长、得率较低的缺点。

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生榛蘑里提取纯化紫杉醇的方法，特别是涉及一种利用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法。

背景技术：

国内均从红豆杉科植物短叶红豆杉和中间红豆杉的针叶和树皮及云南红豆杉等植物中提取紫杉醇，原料资源单一，价格昂贵，

国内提取紫杉醇工艺主要是采用甲醇、丙酮、乙酸乙酯等作为提取溶剂，采用液液萃取、固液萃取法，提取时间16-48小时，近年也有采用超声波、微波提取技术的，用柱色谱纯化，其纯化效果远远不如运用超高压提取、生物酶解、色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的效果。

发明内容：

本发明方法采用超高压提取技术、生物酶解、高速逆流色谱技术，紫杉醇有效成分含量较高，高达99.7％。本发明优点：超高压提取在常温进行，营养成分破坏少；生物酶解温度低，且采用离子液体做为溶剂，紫杉醇有效成分提取率大大加强；同时采用高速逆流色谱技术纯化，克服了常规技术获得紫杉醇时间较长、得率较低的缺点。

本发明的目的在于克服常规技术提取时间较长、产品纯度低等缺点，提供一种利用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法，其步骤如下：

(1)超高压提取：干燥野生榛蘑粉碎至20-40目，加入适量倍数的提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在一定超高压力下处理3-5分钟，回收溶剂；

(2)生物酶解：称重提取液，加入提取液质量5-8倍数的离子液体及适量复合酶，在45-50℃下酶解2-4h；

(3)收集：回收液体，薄层层析检测分析，收集紫杉醇部分；

(4)粗过滤：过滤，合并两次滤液，得紫杉醇粗提液；

(5)浓缩喷粉：将紫杉醇粗提液浓缩至22°Bé，并喷成粉；

(6)柱层析：将所得粗品粉末，溶于有机溶剂，加适量柱填料搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱进行柱层析；

(7)洗脱：以2-4BV/h流速，先用水，再用不同体积浓度溶剂进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪监测；

(8)真空冷冻干燥：收集紫杉醇溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；

(9)分相：称取一定克数紫杉醇，选择适当的HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；

(10)HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入HSCCC螺旋管，分离纯化紫杉醇提取物，得到含量为99.5％以上的成品。

具体实施方式：

实施例1：一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的新方法，生产步骤如下：

(1)超高压提取：5000g干燥野生榛蘑粉碎至20目，加入5倍的乙酸乙酯、二氯甲烷(4∶1)提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在200MPA超高压力下处理3分钟，回收溶剂；