[发明专利]一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法

权利要求书

1.一种采用超高压提取、生物酶解、逆流色谱纯化野生榛蘑紫杉醇的方法，其步骤如下：

(1)超高压提取：干燥野生榛蘑粉碎至20-40目，加入适量倍数的提取溶剂，将混合物放入耐压袋，在一定超高压力下处理3-5分钟，回收溶剂，其中，所述的提取溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷，超高压力为200-400MPA；

(2)生物酶解：称重提取液，加入提取液质量5-8倍数的离子液体及适量复合酶，在45-50℃下酶解2-4h；其中，所述的复合酶为纤维素酶、果胶酶、葡聚糖酶、木聚糖酶中的两种或两种以上，加量为离子液体重量的0.2-0.3‰，离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐或1-烷基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐；

(3)收集：回收液体，薄层层析检测分析，收集紫杉醇部分；

(4)粗过滤：过滤，合并两次滤液，得紫杉醇粗提液；

(5)浓缩喷粉：将紫杉醇粗提液浓缩至22°Bé，并喷成粉；

(6)柱层析：将所得粗品粉末，溶于有机溶剂，加适量柱填料搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱进行柱层析；其中，所述的有机溶剂为丙酮、二氯乙烷、乙酸乙酯中的任意一种，柱填料为硅胶、氧化铝、CIS反相硅胶中的任意两种或两种以上；

(7)洗脱：以2-4BV/h流速，先用去离子水，再用50％、60％、70％、80％体积浓度的甲醇溶剂进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪监测；

(8)干燥：真空冷冻干燥：收集紫杉醇溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；

(9)分相：称取一定克数紫杉醇，选择适当的HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；其中，所述的HSCCC溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水3:5:2、正丁醇-丙酮-水4:2:5、氯仿-乙醇-水5:4:3中的任意一种；

(10)HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为800-1000r/min，以2-3mL/min的流速泵入HSCCC螺旋管，分离纯化紫杉醇提取物，得到含量为99.5％以上的成品。