[发明专利]一种CIK淋巴细胞的扩增激活方法

说明书

本发明公开了一种使用转染功能蛋白质的宿主细胞,联合多种蛋白质扩增激活CIK细胞的方法。本发明的优点是与现有的方法相比，本发明扩增和激活的CIK细胞的纯度更高、扩增效率更高、杀伤肿瘤和肿瘤微环境中TAMs的能力更强。本发明在控制和缓解部分疾病的进展,如癌症、传染性疾病、糖尿病、或器官移植和乙肝方面具有广阔的前景。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体是指使用转染了多种蛋白质的宿主细胞，联合多种蛋白共同作用定向扩增激活CIK淋巴细胞的方法。

背景技术

CIK细胞治疗对多种肿瘤例如：肺癌、头部和颈部鳞状细胞癌、肉瘤癌和急性白血病等肿瘤治疗有明显疗效。目前CIK细胞治疗在美国主要用来和手术、化疗和放疗联合使用解决肿瘤的复发问题。CIK细胞数量和杀伤功能与疗效直接相关，治疗中存在的问题在于获得高纯度的CIK细胞非常困难。传统使用的白介素2、IL-1α、IFN-γ,CD3mAb纯度低(20％-30％)；扩增后的CIK细胞杀伤功能低下，不能满足临床需求。本发明人之前的发明采用转染CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163和CD137L蛋白质的K562细胞(以下简称宿主细胞)用于扩增NK细胞。本发明将宿主细胞结合传统使用的白介素2、IL-1α、IFN-γ,CD3mAb定向扩增激活CIK细胞，解决了CIK数量和纯度的问题，能够充分满足临床治疗的需求。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提出一种更加有效的方法，实现CIK淋巴细胞的扩增。

本发明是通过下述技术方案得以实现的：一种CIK淋巴细胞的扩增激活方法，使用转染了蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F的宿主细胞，联合蛋白质A1、蛋白质B1、蛋白质C1、蛋白质D1共同对淋巴细胞进行扩增激活，得到CIK淋巴细胞；所述蛋白质A包含CD8α的功能片段和白介素21的功能片段；蛋白质B包含CD14的功能片段；蛋白质C包含CD19的功能片段；蛋白质D包含CD86的功能片段；蛋白质E包含CD163的功能片段；蛋白质F包含CD137L的功能片段；蛋白质A1包含白介素2的功能片段、蛋白质B1包含IL-1α的功能片段、蛋白质C1包含IFN-γ的功能片段、蛋白质D1包含CD3mAb的功能片段。

进一步地，所述宿主细胞为K562细胞。

进一步地，所述的蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F的剂量均为50pM-1000pM。蛋白质A1、蛋白质B1、蛋白质C1的剂量均为10-1000IU/毫升，蛋白质D1的剂量在10-1000纳克/毫升；所述宿主细胞与淋巴细胞的用量比例(数量比)为宿主细胞：淋巴细胞＝1-10：1，更优选地，为宿主细胞：淋巴细胞＝1-4：1，最优选地为1∶1。

进一步地，所述蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F为纯化的蛋白质或由宿主细胞在细胞膜表面即时表达，蛋白质A1、蛋白质B1、蛋白质C1、蛋白质D1为纯化的蛋白质；所述纯化是指质量分数在90％以上。

进一步地，所述蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F分别为CD8α-白介素21复合物、CD14、CD19、CD86、CD163和CD137L，其中，CD8α为在宿主细胞膜上表达的膜蛋白，CD8α连接白介素21后使得白介素21表达在细胞膜上，成为跨膜蛋白；CD14、CD19、CD86和CD137L均为膜蛋白。

进一步地，所述淋巴细胞选自外周血淋巴细胞、脐带血淋巴细胞、CIK细胞中的一种或多种，或者为外周血淋巴细胞、脐带血淋巴细胞、CIK细胞中的一种或多种和其它淋巴细胞的组合，或为白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L、白介素2、IL-1α、IFN-γ、CD3mAb中的一种或多种按照任意比组成的混合物作用于人体血管中的血液所产生的淋巴细胞。

进一步地，转染了蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F的宿主细胞通过蛋白稳定表达系统得到。