[发明专利]一种抑制hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列、重组腺病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抑制hsa‑miR‑221‑3p的寡核苷酸序列，为如下序列中的一种：序列1：(GAAACCCAGCTGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5序列2：(GAAACCCAGCCGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5；序列3：(GAAACCCAGCGGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5；序列4：(GAAACCCAGCGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5其中，四种序列中AAGA部分可用其他序列代替，在胞内进行DNA同源重组法制备获得重组腺病毒(Ad‑s‑miR‑221‑3p)，并进一步提供了所述重组腺病毒在治疗非酒精性脂肪肝方面的应用，包括降低肝脏甘油三酯水平，降低血甘油三酯水平，改善高脂血症，增加机体胰岛素敏感性，为改善非酒精性脂肪肝提供了新的解决思路。

技术领域

本发明属于基因工程、生物医疗技术领域，特别是涉及一种利用寡核苷酸串联法制备抑制hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列、重组腺病毒及其降低肝脏及血甘油三酯的应用。

背景技术

肝脏是调节机体代谢的中央器官，如脂代谢，包括脂合成、脂蛋白吸收和分泌，脂肪酸氧化等。非酒精性脂肪肝是一种无过量饮酒史，以肝实质细胞脂肪变性和堆积为特征的临床综合症，是最常见的肝脏疾病，在我国发病率约为25％到40％。随着我国国民生活水平的不断提高，饮食结构不断改变，高热量、高脂饮食非常流行。此外，随着生活节奏的加快，工作压力的增加，很多人缺少运动等，导致该病呈快速增长趋势，如不加以控制，容易发展成为肝纤维化及肝癌。

肝脏脂代谢调控网络非常复杂，大量与肝脂代谢直接或间接相关的基因已被发现，如脂肪酸合成相关的基因：SCD-1、SREBP-1C、ACC等，与甘油三酯合成相关的基因：PPARγ、LXRα、DGAT1、DGAT2等，与脂肪酸氧化相关的基因：PPARα、CPT1、MCAD、LCAD、UCP2等，与脂肪酸吸收相关的基因：CD36、PPARδ等。

miRNA是一类18到25个核苷酸的内源性非蛋白编码RNA，在哺乳动物及人类细胞中通过结合到靶基因mRNA的3’非翻译区，抑制靶蛋白的翻译。hsa-miR-221-3p最初被发现在人肝癌细胞中过度表达，与肝细胞增殖及肝再生密切相关。研究表明，在肥胖病人脂肪细胞中，miR-221呈现过度表达。此外，在肌肉分化以及胰岛素抵抗过程中，miR-221也扮演了重要角色。

目前，尚未见通过抑制hsa-miR-221-3p来有效治疗非酒精性脂肪肝及高脂血症、胰岛素抵抗等的相关研究。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种抑制肝细胞hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列、重组腺病毒及其制备方法，以及降低肝脏和血甘油三酯的应用，改善非酒精性脂肪肝患者脂代谢异常及增加胰岛素敏感性。

本发明第一方面提供了一种抑制hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列，所述寡核苷酸序列为如下序列中的一种：

序列1：(GAAACCCAGCTGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5

序列2：(GAAACCCAGCCGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5

序列3：(GAAACCCAGCGGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5

序列4：(GAAACCCAGCGACAATGTAGCTAAGA)_n≧5

或以上序列中AAGA部分用其他间隔序列代替所得序列。

本发明第二方面提供了含有上述抑制hsa-miR-221-3p寡核苷酸序列的原核、真核穿梭载体、腺病毒载体。