[发明专利]一种抑制hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列、重组腺病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.含有抑制hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列的重组腺病毒的应用，其特征在于，所述重组腺病毒在制备治疗非酒精性脂肪肝产品中的应用，所述抑制hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列为如下序列中的一种：

序列1：(GAAACCCAGCTGACAATGTAGCTAAGA)n≧5；

序列2：(GAAACCCAGCCGACAATGTAGCTAAGA)n≧5；

序列3：(GAAACCCAGCGGACAATGTAGCTAAGA)n≧5；

序列4：(GAAACCCAGCGACAATGTAGCTAAGA)n≧5；

或以上序列中AAGA部分用其他间隔序列代替所得序列。

2.如权利要求1所述的重组腺病毒的应用，其特征在于：所述治疗非酒精性脂肪肝产品为降低肝脏甘油三酯水平，降低血甘油三酯水平，增加机体胰岛素敏感性的产品。

3.如权利要求1所述的重组腺病毒的应用，其特征在于，所述重组腺病毒的制备方法包括以下步骤：

a、合成权利要求1所述的抑制hsa-miR-221-3p的寡核苷酸序列；

b、根据步骤a所得寡核苷酸序列得到shRNA，并与穿梭载体进行连接，获得抑制hsa-miR-221-3p的重组穿梭质粒；

c、将步骤b所得重组穿梭质粒线性化，再与腺病毒骨架载体在体外共转化到感受态细胞中，通过同源重组获得抑制hsa-miR-221-3p的重组腺病毒载体；

d、将步骤c所得载体线性化后用脂质体转染293A细胞，获得抑制hsa-miR-221-3p的重组腺病毒。

4.如权利要求3所述的重组腺病毒的应用，其特征在于：步骤a所述shRNA两端分别引入BgL2和HindIII酶切位点，退火形成双链结构，该双链结构与经BgL2和HindIII酶切过的Track-U6穿梭载体进行连接。

5.如权利要求4所述的重组腺病毒的应用，其特征在于：得到步骤d所述的重组腺病毒后，在293A细胞中进行扩大培养，并采用氯化铯密度梯度离心进行纯化和浓缩。