[发明专利]ORF7缺陷型水痘病毒、含有该病毒的疫苗及应用

说明书

本申请是申请号为201080033216.8的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于病毒学和生物药学领域。具体而言，本发明提供了ORF7缺陷型水痘病毒、含有该病毒的疫苗及其应用，为水痘-带状疱疹病毒等的预防提供良好的候选疫苗药物。

技术背景

水痘-带状疱疹病毒(Varicella zoster virus:VZV，简称“水痘病毒”或“VZV”)是严格种属特异性的病毒，是导致人患水痘或带状疱疹的致病因子。其中，P-Oka株是由Takahashi等于1971年在日本Oka姓氏的3岁男孩的水痘囊泡液中分离出来的，并经人胚肺细胞培养获得的，被认为具有引发水痘和带状疱疹功能(Takahashi M,Otsuka T,Okuno Y,et al.Live vaccine used to prevent the spread of varicella in children in hospital.Lancet 1974；2:1288–90.)。

美国专利3985615中公开了P-Oka株通过豚鼠胚胎组织(GPEC)和人胚肺细胞多次传代，产生减毒的V-Oka病毒，制备预防水痘的V-Oka活疫苗。美国专利4000256中叙述了用人胚成纤维细胞WI-38株传代培养VZV病毒10-80次生产VZV减毒疫苗。但迄今为止，只有P-Oka株经细胞传代获得的“水痘病毒减毒冈株”(特公昭53-41202号公报；Lancet 2：1288-1290，1974)为WHO批准的唯一用于预防水痘或带状疱疹疫苗制备的毒株，该毒株制备的疫苗在全球得到了广泛使用[Requirement for Varicella Vaccine(Live)Adopted 1984:WHO Technical Report Series,No.725,pp.102-104,1985]。但是，尽管水痘疫苗接种的人群比水痘自然感染人群的带状疱疹发生率低，且大多为免疫功能低下儿童，但是，带状疱疹发生是不争的事实，且从患者的疱疹中分离到V-Oka株(Schmid D.S，et al.Impact of Varicella Vaccine on Varicella-Zoster Virus Dynamics，CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS,Jan.2010,p.202–217)。

专利CN1163604C涉及水痘病毒减毒冈株的鉴定，并且从分子水平上揭示该毒株是由多个不同序列组成的混合株。野毒株可能存在于其中，源于V-Oka疫苗接种者产生V-Oka株的带状疱疹已有报道。故该减毒株的潜在危害性还是存在的，但是，现在还没有其它预防VZV的疫苗株上市。该病毒具有严格种属特异性，人是其唯一的自然宿主，没有合适的动物模型研究VZV基因功能；再者该病毒对宿主细胞具有强结合性，游离的病毒极易失活，获得可供转化的VZV病毒DNA非常困难，故很长时间以来该病毒基因功能研究的进展极为缓慢。

但是，随着细菌人工染色体(BAC)在研究中的应用，组织培养技术的进步，异种生物间器官移植屏障的突破(联合免疫缺陷型小鼠的开发)，拓宽了种属特异的VZV基因功能研究的空间，可以在体外或移植到动物体内进行VZV基因功能研究。2004年Kazuhiro N.等在“Cloning of the varicella-zoster virus genome as an infectious bacterial artificial chromosome in Escherichia coli”一文中揭示被克隆到BAC载体上的VZV Oka株全基因组，可以在大肠杆菌和人胚肺细胞中增殖，BAC可被一同转化到人胚肺细胞中的Cre酶精确切除，产生的重组VZV病毒具有p-Oka同样结构，完全具有亲本病毒的特性。BAC的应用为VZV的功能研究带来了极大便利，可以对VZV每个基因进行功能研究，加速了VZV基因功能研究的进程。

水痘-带状疱疹病毒(VZV)的ORF7位于病毒基因组的8607-9386bp之间，编码一个29kDa的蛋白，可能位于皮层结构中，它的功能目前仍不清楚。