[发明专利]对2;4-二氯苯氧乙酸检测的抑制传感器的制备方法及其应用

说明书

一种对2,4‑二氯苯氧乙酸检测的抑制传感器的制备方法及其应用，先将磷酸钙微球分散于壳聚糖中，再将酶固定到磷酸钙微球上，最后将过氧化氢酶和磷酸钙微球复合物固定在玻碳电极上即得到本传感器，本发明的使用可克服传统检测2,4‑d的仪器价格昂贵，且需要复杂的样品前处理等缺点，大大降低了检测费用，更加简便快捷。

技术领域

本发明涉及酶传感器的制备技术领域，具体涉及一种基于过氧化氢酶固定在磷酸钙微球上结合流动注射对2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-d）检测的抑制传感器。

背景技术

2,4-d（2,4-二氯苯氧乙酸）是一种主要的除草剂，曾作为用于研究 微生物降解氯化芳香化合物的模型化合物，也是一种人工合成的植物激素，具有与 生长素（IAA）相似的生理效应。2,4-二氯苯氧乙酸类除草剂，可用作植物生长调节，是用于诱导愈伤组织形成的常用的生长素类似物的一种。但是，如过多地使用2,4-d，由于其吸附性强，残留微量药剂会造成一定的危害，为了确定食品的安全性，人们通常对植物中的2,4-d含量进行检测分析。

目前，检测2,4-d的方法主要有气相色谱、高效液相色谱、气质联用，这些方法具有复杂的样品前处理、昂贵的仪器、有毒的溶剂、以及需要经过专门培训的人才能操作等缺陷。

发明内容

本发明目的是提出一种可用于方便检测2,4-d的的抑制传感器。

本发明包括以下步骤：

1）超声条件下，将磷酸钙微球分散于壳聚糖中，取得磷酸钙的壳聚糖溶液；

2）以去离子水溶解过氧化氢酶，取得酶溶剂；

3）将磷酸钙的壳聚糖溶液与酶溶剂混合，静置反应24±5小时，取得过氧化氢酶和磷酸钙微球复合材料；

4）将过氧化氢酶和磷酸钙微球复合材料滴涂于洁净的玻碳电极表面，于4℃冻干。

抑制传感器由于仪器相对实惠、样品不要复杂的前处理、操作简单等特点，受到越来越多的关注，研究(L.M.C. D. J. WORT, the effect of 2,4-dichlorophenoxyaceticacid On phosphorylase, phosphatase, a.mylase, Catalase, and peroxidaseactivity In wheat, Plant Physiol, 28(1953) 135-9）表明，2,4-d对小麦中的过氧化氢酶具有抑制作用，因此将过氧化氢酶固定在磷酸钙微球上结合流动注射根据2,4-d对过氧化氢酶的抑制作用进行2,4-d的检测具有非常重要的意义。

进一步地，本发明所述磷酸钙微球和过氧化氢酶的混合质量比为0.5～1∶1。使抑制率达到最大，比例太低，即磷酸钙微球太少，则固定的过氧化氢酶就少，进而抑制率低，而比例太大，即磷酸钙微球太多，则阻碍了电子传递，抑制率也降低。

所述磷酸钙的壳聚糖溶液中磷酸钙的浓度为5mg/mL，使磷酸钙较好的分散于壳聚糖中。

所述酶溶剂中过氧化氢酶的浓度为8 mg/mL。此时，酶活力最大，浓度太低时，酶活力也低．浓度过大时，酶分子活性部位被掩盖，酶活力下降，而且加酶量过大也会出现包埋不稳定，酶容易泄露，导致酶活力下降．即最佳加酶量为8 mg/mL。

此外，本发明还提出了以上传感器应用于对2,4-二氯苯氧乙酸浓度的检测。

检测方法包括以下步骤：

1）将所述传感器固定于流动电化学池中；

2）将磷酸缓冲溶液以3 mL/min的速度注入流动电化学池中，采用电流-时间曲线方法检测，直到电流与时间关系曲线中电流基线走平；