[发明专利]一种稀土荧光标记的复合微球标记物及其制备方法

权利要求书

1.一种稀土荧光标记的复合微球标记物，其特征在于，先将聚乙烯吡咯烷 酮、过硫酸钾、苯乙烯加入乙醇或水介质中溶解后置于超声波反应器中，在氮气 的保护下产生聚合反应；在一定温度下、且保持恒定的功率和氮气气流速，反应 一定时间后得到聚苯乙烯纳米微球分散液；再利用带有活性基团的有机硅烷在二 氧化硅微球引入活性基团，再将稀土荧光络合物4,7-二氯磺基苯-1,10菲咯啉-2,9 二羧酸-铕或4,4,-双(1,1,1,2,2,3,3,-七氟-4,6,-己二酮基)氯磺基-邻-三联苯-铕 通过化学键合的形式固定于二氧化硅微球的表面，而后在微球表面以带有活性基 团的有机硅烷再次引入活性基团,制成稀土荧光标记的复合微球标记物。

2.一种如权利要求1所述的一种稀土荧光标记的复合微球标记物的制备方 法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、原材料预备：

按重量预备原材料：15-30g聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.10g过硫酸钾、8-12g 苯乙烯、80-120ml乙醇或水和4,4,-双(1,1,1,2,2,3,3-七氟-4,6-己二酮 基)氯磺基-邻-三联苯；

(2)、制备复合微球：

1)、制备氨基化纳米微球：

将15-30g聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.10g过硫酸钾、8-12g苯乙烯加入到 80-120ml乙醇或水介质中溶解后置于超声波反应器中，通氮气排除体系中的氧 气，开启超声波发生器进行聚合反应，在反应6-10小时后得到聚苯乙烯纳米微 球分散液；

离心搜集聚苯乙烯纳米微球，以5mL无水乙醇悬浮，加入5μL氨基硅烷， 室温搅拌反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集；

2)、制备稀土荧光纳米微球：

将4,4,-双(1,1,1,2,2,3,3-七氟-4,6-己二酮基)氯磺基-邻-三联苯 配制成1mg/mL，按等体积加入到氨基化纳米微球悬浮液中，室温避搅拌15min， 离心收集，悬浮于50mmol/L、pH值＝7.8的磷酸盐缓冲液中，加入等体积0.1mol/L 氯化铕溶液，室温避光搅拌反应10min，

离心收集后悬浮于等体积无水乙醇溶液中，加入5μL氨基硅烷，室温搅拌 反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集，即得到稳定的稀土荧光标记的复合 微球标记物。

3.一种如权利要求1所述的一种稀土荧光标记的复合微球标记物的制备方 法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、原材料预备：

按重量预备原材料：15-30g聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.10g过硫酸钾、8-12g 苯乙烯、80-120ml乙醇或水和4,7-二氯磺基苯-1,10菲咯啉-2,9二羧酸；

(2)、制备复合微球：

1)、制备氨基化纳米微球：

将15-30g聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.10g过硫酸钾、8-12g苯乙烯加入到 80-120ml乙醇或水介质中溶解后置于超声波反应器中，通氮气排除体系中的氧 气，开启超声波发生器进行聚合反应，在反应6-10小时后得到聚苯乙烯纳米微 球分散液；

离心搜集聚苯乙烯纳米微球，以5mL无水乙醇悬浮，加入5μL氨基硅烷， 室温搅拌反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集；

2)、制备稀土荧光纳米微球：

将4,7-二氯磺基苯-1,10菲咯啉-2,9二羧酸配制成1mg/mL，按等体积加入 到氨基化纳米微球悬浮液中，室温避搅拌15min，离心收集，悬浮于50mmol/L、 pH值＝7.8的磷酸盐缓冲液中，加入等体积0.1mol/L氯化铕溶液，室温避光搅拌 反应10min，

离心收集后悬浮于等体积无水乙醇溶液中，加入5μL氨基硅烷，室温搅拌 反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集，即得到稳定的稀土荧光标记的复合 微球标记物。

4.根据权利要求2或3所述的一种稀土荧光标记的复合微球标记物的制备 方法，其特征在于，所述4,4,-双(1,1,1,2,2,3,3-七氟-4,6-己二酮基) 氯磺基-邻-三联苯或4,7-二氯磺基苯-1,10菲咯啉-2,9二羧酸与乙醇或水的体 积比为3:1。

5.根据权利要求2或3所述的一种稀土荧光标记的复合微球标记物的制备 方法，其特征在于，所述聚合反应过程中通循环水维持的反应温度为60-80℃， 且保持恒定的功率300W和恒定的氮气气流速。