[发明专利]一种猪趋化因子介导的A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白及疫苗

说明书

本发明提供一种猪趋化因子介导的A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白，其氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。本发明还提供包含上述猪A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白的疫苗。应用本发明的疫苗免疫动物，一周后均可检测到FMDV特异性抗体，抗体效价不断升高，免疫四周时抗体效价最高。用1000个猪半数感染量（PID50）的A/SEA/97系HNXX株猪体适应毒攻击后，本发明的疫苗免疫组猪均可完全抵抗强毒攻击，攻毒后10天内无一头猪表现出临床症状。说明将A8抗原通过XCL1靶向XCR1受体，再用CpG激活树突状细胞能显著提高抗原的体液免疫和细胞免疫水平，因而，是一种有效的猪趋化因子介导的A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白疫苗。

技术领域

本发明属于口蹄疫免疫技术领域，具体涉及一种猪趋化因子介导的A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白及疫苗。

背景技术

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdisease virus，FMDV)引起的急性、热性、高度接触性传染病，主要侵害对象为牛、羊和猪等主要畜种及其它家养和野生偶蹄动物，易感动物多达70余种。给畜牧业发展造成巨大损失。FMDV不仅宿主范围广，传播迅速，变异快，而且血清型众多。口蹄疫病毒共分为A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3七个血清型，各血清型间缺乏交叉保护性，不同血清型的亚型和分离株间抗原变异很大。目前，对于口蹄疫的防治以免疫接种灭活疫苗为主，该疫苗为FMD疫情防控做出了重大贡献。但灭活疫苗的生产和应用存在诸多的缺点。即生产该疫苗需要动用活毒，需要建设高级生物安全的实验室及生产车间以防散毒；需要纯化病毒抗原以便于区分感染动物和疫苗免疫动物；需要冷链运输和低温贮存以保证抗原稳定性；疫苗免疫不能阻断形成病毒携带状态，更为严重的是病毒灭活不完全有引发疫情的危险。为了克服这些缺点，研究者一直在寻找一种更为安全有效的口蹄疫疫苗。随着免疫学研究的深入、以及抗原递呈机理与方法的研究进展，口蹄疫病毒抗原位点定位的研究日益明朗，在疫苗分子设计、复合表位疫苗与免疫佐剂等方面都取得了明显进展。

表位蛋白疫苗与灭活疫苗相比，具有抗原稳定性好、生产及应用安全、疫苗免疫动物易与FMDV感染动物区分等诸多优点。表位疫苗的研究尽管近年来发展迅速，但存在免疫原性较弱的缺点。

树突状细胞（DC）是最重要的抗原递呈细胞（antigen-presenting cells，APCs），在启动与控制获得性免疫应答方面发挥着关键性的作用。通过DC细胞表面受体将抗原蛋白靶向到DC细胞，可以显著提高抗原递呈效率约100倍（Idoyaga et al，2011），即使较少量的抗原也能够获得很好的细胞免疫与体液免疫效果，在肿瘤免疫治疗与研究新型高效疫苗方面具有重要的应用前景。趋化因子XCL1是DC细胞表面趋化因子受体XCR1的配体，具有招募DC细胞的作用；不同动物种表达的XCL1序列有差异，因而在利用XCL1介导抗原靶向时具有种属特异性。在人与小鼠体内的研究表明，表达XCR1受体的DC细胞类型为CD8α⁺DCs，该类细胞在体内的占比较少，主要分布于外周淋巴循环与上皮组织。该类DC细胞摄取抗原分子后可以通过MHC-I与MHC-II两类分子交互递呈抗原给CD8⁺T细胞（CTL）与CD4⁺T细胞，可以产生强而持久的细胞免疫与体液免疫应答。通过趋化因子XCL1靶向抗原于该类DC表面，将有可能提高抗原递呈效果，提高对靶动物的免疫效果。研究表明，将抗原靶向于处在稳定阶段的DC表面不足以诱导免疫应答，有可能会引起免疫耐受。因此为了产生有效的免疫应答，还应该加入佐剂（如Toll样受体的配体）以激活DCs。如将抗原靶向于小鼠DC表面的XCR1受体时加入LPS（Toll样受体4的配体）、CpG（Toll样受体9的配体）可诱导产生CTLs和抗体应答。如果不加佐剂，虽然会引起短暂的T细胞增殖，但随后就会被清除或出现无应答。

发明内容