[发明专利]桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术制药工程技术领域，尤其涉及一种桑叶中降糖小分子活性组分 的提取方法。

背景技术

桑叶，桑科中植物桑的干燥叶，味苦、甘，性寒。在古代，中医就以桑叶作中药治 疗消渴症；现代桑叶也常配伍与中药复方应用于临床治疗。研究表明，桑叶是上好的功 能产品，具有提高免疫力、降血糖、抗肿瘤、抗病毒、抗肥胖、延缓衰老等功能。现阶 段，已分别研究了桑叶中多糖、生物碱、黄酮等对降血糖起到较显著的作用，但桑叶中 小分子物质对降血糖的作用却很少被报道。

大量研究表明PPARγ与2型糖尿病的发生相关性很大。PPARγ是核受体超家族成 员，被激活后可以促进脂肪细胞的分化，通过相关调节使对胰岛素敏感的小脂肪细胞的 数量增加，脂联素分泌增多，改善胰岛素抵抗，使机体对胰岛素的敏感性增强，是目前 人们研究抗糖药物的一种有效途径。

发明内容

本发明针对以上现有技术，提供一种低成本、快速、简洁地从桑叶中提取具有降糖 活性的小分子组分的方法。

为达到上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

一种桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，该方法包括以下步骤：

(1)取洗净并干燥的桑叶，粉碎，得到桑叶粉；

(2)放入干燥洁净的容器中，加入蒸馏水，震荡混匀，然后加热至75-100℃煎煮 2-4h，过滤；

(3)取滤渣重复步骤(2)1-3次，合并所得滤液，得粗提液；

(4)在粗提液中加入乙醚进行萃取脱脂处理，萃取完成后取上层水液，浓缩至原 体积的1/2-1/4；

(5)加入2-4倍体积的无水乙醇浸提，离心，所得上清液烘干，然后依次用无水 乙醇、丙酮、乙醚洗涤2-4次，烘干得粗提物；

(6)在粗提物中加入蒸馏水进行复溶，使用25000-35000分子量的超滤膜进行超 滤，收集滤过液，烘干，得到目的小分子活性组分。

所述步骤(2)中桑叶粉或滤渣与蒸馏水的料液比为1:(20-40)(g/mL)。

所述步骤(4)中乙醚与粗提液的体积比为1:(10-20)。

所述步骤(6)中粗提物与蒸馏水的料液比为1:(10-20)(g/mL)。

所述步骤(6)中超滤的条件为：室温20-30℃，驱动压力0.25MPa。

本发明采用水提醇沉法，加上中间步骤的乙醚萃取脱脂，粗提桑叶中的有效活性成 分；然后通过超滤技术分离上述初提物，进一步获取桑叶中的小分子活性组分。由于水 提醇沉法得到的上清液含有较多的多糖、蛋白质等大分子复合物，具有较强的吸水性， 故单凭烘干无法除去其中的水分，会使沉淀产物含有较多的水分，影响产物性状(呈胶 状，而非粉末状固体)和纯度(无法进行精确的定量分析)。醇沉后用无水乙醇洗涤， 除去一部分水分；再用可溶于水的丙酮洗涤，确保水分除净；最后用无水乙醚洗涤沉 淀物，除去残存的乙醇、丙酮和溶于其中的水分，这样就可以有效除去醇沉上清中的 水分，得到较纯的粉末状粗提活性组分，以利于工业化大规模进一步地分离纯化。采用 超滤技术分离上述粗提活性组分得到的小分子活性组分，运用Hela高通量细胞筛选模 型，检测其有效组分活性，结果显示其含有PPARγ配体的激活效应，能激活PPARγ信 号通路，可作为PPARγ激活剂，且安全有效，毒性较低，不会引起并发症。

本发明提供了一种低成本、快速、简洁地提取桑叶中活性小分子组分的方法，该活 性小分子组分被证明可作为抗糖尿药物的有效活性组分，且安全有效，毒性较低。本发 明适用于活性小分子抗糖尿药物的提取，可有效降低降糖活性小分子药物的成本，且方 法简便，能够有效满足工业化大规模生产需求。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示性 的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术 语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。

实施例1：桑叶中降糖小分子活性组分的提取

1.桑叶中有效成分的粗提

(1)称取洗净并干燥的桑叶50g，粉碎，得到桑叶粉；

(2)放入干燥洁净的锥形瓶中，加入1L蒸馏水，即料液比1:20(g/mL)，震荡 均匀，将样品于100℃煎煮2h，过滤；