[发明专利]一种提高基因编辑后绵羊胚胎成纤维细胞同源重组修复频率的方法有效
| 申请号： | 201610104796.4 | 申请日： | 2016-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN105671045B | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 皮文辉;周平;郭延华;王伟;黄兰兰;韩猛立;简子健;王新华;刘守仁 | 申请（专利权）人： | 新疆农垦科学院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/87 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;白艳 |
| 地址： | 832000 新疆维*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 基因 编辑 绵羊 胚胎 纤维 细胞 同源 重组 修复 频率 方法 | ||
1.抑制Lig4基因表达和/或活性的物质在制备促进离体绵羊胚胎成纤维细胞在基因编辑时进行同源重组修复产品中的应用；
所述抑制Lig4基因表达和/或活性的物质为用于干扰离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达的siRNA；所述siRNA的核苷酸序列为序列表中序列3或序列4。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述基因编辑为将经过特定位点剪切后外源DNA分子导入离体绵羊胚胎成纤维细胞中，使所述剪切后外源DNA分子在细胞中进行同源重组修复；
或所述基因编辑为将外源DNA分子同源重组到经过特定位点剪切后的离体绵羊胚胎成纤维细胞基因组上。
3.一种使离体绵羊胚胎成纤维细胞在基因编辑时进行同源重组修复频率提高的方法，包括如下步骤：抑制离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达的物质抑制进行基因编辑的离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达，实现离体绵羊胚胎成纤维细胞在基因编辑时进行同源重组修复频率提高；
所述抑制离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达的物质为用于干扰离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达的siRNA；
所述siRNA的核苷酸序列为序列表中序列3或序列4。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述抑制进行基因编辑的离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达为将用于抑制离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达的物质导入所述进行基因编辑的离体绵羊胚胎成纤维细胞中。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
所述基因编辑为将经过特定位点剪切后外源DNA分子导入离体绵羊胚胎成纤维细胞中，使所述剪切后外源DNA分子在细胞中进行同源重组修复；
或所述基因编辑为将外源DNA分子同源重组到经过特定位点剪切后的离体绵羊胚胎成纤维细胞基因组上。
6.根据权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：
所述使离体绵羊胚胎成纤维细胞在基因编辑时进行同源重组修复频率提高为抑制进行基因编辑的离体绵羊胚胎成纤维细胞中Lig4基因表达的细胞同源重组修复频率高于进行基因编辑的离体绵羊胚胎成纤维细胞的同源重组修复频率。
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