[发明专利]一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法

权利要求书

1.一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法，其特征在于，包括以 下步骤：

(1)磷脂酶印迹激活：将磷脂酶溶解于含印迹因子的缓冲液中进行激活， 印迹因子为磷脂或其衍生物；

(2)印迹磷脂酶固定化：加入硅藻土，充分震荡混匀、静置，完成固定化 吸附；

(3)冻干：将完成固定化及抗冻保护的印迹磷脂酶进行预冻，再进行真空 冷冻干燥呈粉末，即为固定化印迹磷脂酶粉；

(4)洗涤：固定化印迹磷脂酶粉中加入洗涤液，充分涡旋振荡分散，静置 后滤去溶剂，重复洗涤，洗去印迹因子；

(5)脱溶：将洗涤好的酶粉进行真空干燥，除去残留的有机溶剂，得成品 酶粉。

2.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(1)中缓冲液浓度为10～500mMol/L，激活条件为4～40℃、 2～30min。

3.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(1)中所述的印迹因子与缓冲液的体积比为1:10～250。

4.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(1)中所述的缓冲液为柠檬酸或磷酸或Tris-HCl；所述磷脂 酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D中的一种；所述磷脂或其衍 生物为磷脂酸、磷脂钙盐、磷脂镁盐的一种。

5.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(2)中静置的温度为4～40℃、时间为2～30min。

6.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(2)中的硅藻土是按照上一步骤体系体积的10～100％(w/v) 加入。

7.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(3)中预冻的温度为-20～-80℃，真空冷冻干燥的条件为温 度为-60～-80℃、真空度1～500Pa。

8.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(4)中，按照固定化印迹磷脂酶粉2～10倍体积加入洗涤液， 涡旋振荡分散的温度为4～40℃，静置时间为2～30min，重复洗涤次数为3～4次， 洗涤液为正己烷、石油醚，乙醚中的一种。

9.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法， 其特征在于，步骤(1)、(2)之间还进行抗冻保护；在激活的印迹磷脂酶中加 入抗冻保护剂，混合均匀、静置后，完成抗冻保护。

10.根据权利要求9所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方 法，其特征在于，所述的抗冻保护剂为甘油或甘露糖；抗冻保护剂浓度为0～500 mMol/L，静置的温度为4～40℃、时间为2～30min。