[发明专利]一种促进丙酮酸分泌的基因、其提取方法和应用

权利要求书

1.基因psa C在生产丙酮酸中的应用，其特征在于，所述基因psa C的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

2.基因psa C在溶解无机难溶磷中的应用，其特征在于，所述基因psa C的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述基因psaC提取方法包括步骤：

1)在难溶磷无机盐培养基上培养黑曲霉菌H1(Aspergillus niger H1)，从培养的黑曲霉菌H1基因组中提取总RNA，再从总RNA中纯化出mRNA，用引物5'-(GA)₁₀ACTAGTCTCGAG(T)₁₈V-3’ V:A or C or G扩增，合成cDNA第一链；

2)cDNA第一链以5'-AAGCTTAAGGGTATCAACGCAGAGTAC-3为引物，通过LD-PCR合成双链cDNA，

3)将cDNA序列连接到pBluescript SK II(+)上，连接产物电转化到大肠杆菌上，通过难溶磷培养基筛选具有溶磷透明圈的转化子；

4)筛选出的转化子进行转接培养，筛选克隆子进行测序分析，得到全长为1007bp的cDNA序列，利用DNAMAN分析其基因开放阅读框为208个氨基酸。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤3)所述电转化的条件为：每50μL大肠杆菌感受态细胞施加电量25μF，电击的电压为1.5KV。