[发明专利]一种新的EB病毒EBNA1表位肽及其在EBV相关疾病的诊断、治疗和预防中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫治疗领域，具体涉及一种新的EB病毒EBNA1表位肽及其在 EBV相关疾病的诊断、治疗和预防中的用途。

背景技术

EBV(Epstein-Barrvirus，EB病毒)是Epstein和Barr于1964年首次成功地将 Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电 镜观察到的疱疹病毒颗粒。EBV属于疱疹病毒γ亚科，EBV在人群中广泛感染， 根据血清学调查，大多数人幼儿时期就已经感染，在发展中国家健康成年人中， EBV感染比率超过90％，感染后终身潜伏。在绝大多数情况下，病毒感染后并无 明显症状，只有极少数情况下会引起如传染性单核细胞增多症等急性症状。目 前认为，EBV感染与非洲儿童Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、淋巴瘤以及各种免疫抑制 剂治疗患者和器官移植患者的淋巴细胞增生紊乱综合症等密切相关。其中，淋 巴瘤和鼻咽癌是与EBV关系最为密切的两种恶性肿瘤，另外约8-10％的胃癌也与 EBV相关。

EBV引起的疾病和造成的死亡呈现明显的地域性特点。东亚地区EBV相关 死亡人数居世界之首，约占全球EBV相关死亡人数的一半以上。造成这一现象 的因素中，遗传和病毒亚型的分布差异是其中重要的因素。

EBNA1是EBV处于各阶段隐匿状态时，都始终表达的病毒蛋白，对于病毒 基因组在宿主细胞的存在具有至关重要的作用。根据EBV不同基因的多态性， EBV可分为不同亚型。其中，根据EBNA1蛋白第487位氨基酸及相邻几个氨基酸 残基的差异，可以将EBV分为5种亚型，分别为P-ala、P-thr、V-val、V-leu和V-pro。 经调查，五种EBV亚型呈现出明显的地域流行差异，其中，P-thr主要流行于欧 美地区，而东亚地区占绝对优势地位的为V-val亚型。具体的，分别从丹麦和中 国人鼻咽癌和霍奇金淋巴瘤中分离得到的EBV中，丹麦人中近75％为P-thr，而中 国人75％为V-val。日本学者也得到相似的结果。在EBV相关性胃癌的研究中， 美国地区分离的病毒超过50％为P-thr，而从日本地区分离到的无一例外均为 V-val亚型。

与其它亚型相比较，V-val亚型EBV在多项研究中表现出更强的致瘤能力。 V-val亚型EBNA1基因转染293细胞后，较B95-8原型表现出更强的克隆形成能力， 和对低血清的耐受。

由于东亚地区V-val亚型EBV的绝对流行优势，因此，在应用疫苗或过继性 细胞治疗时，必须充分考虑到该地区EBV流行情况。即在东亚地区，应以V-val 亚型EBNA1序列作为抗原进行相应的设计。而目前发现的EBNA1表位，绝大多 数都来源于B95-8病毒株，即P-ala亚型。因此，目前已发现的表位并不能完全适 用于东亚地区V-val亚型EBV相关性疾病的免疫预防和治疗。目前迫切需要发现 新的安全性高且特异性高的V-val亚型EBV的EBNA1表位肽可用于预防和治疗 EBV相关疾病。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题提出的。

本发明采用的技术方案如下：

本发明第一目的为提供一种新的EB病毒EBNA1表位肽，其在HLA-A限制性 条件下被CD8+淋巴细胞特异性识别，其氨基酸序列为GIALAVPQC。

优选的，所述的EBNA1为V-val亚型EB病毒EBNA1，所述的HLA-A限制性 是HLA-A*0201限制性。

本发明第二目的为提供一种制备对EBNA1具有特异性反应的T淋巴细胞的 方法，包括以下步骤：

a将起始细胞与权利要求1或2所述新的EB病毒EBNA1表位肽在抗原提呈 细胞存在的条件下在培养基中共培养，获得含有特异性反应的T淋巴细胞的免疫 细胞培养物；和

b分离发生特异性反应的T淋巴细胞；其中，所述T淋巴细胞为CD8+T淋巴 细胞。

优选的，所述起始细胞为人外周血单个核细胞。

优选的，所述起始细胞为从人外周血单个核细胞中分离的CD8+T淋巴细胞。

优选的，所述特异性反应包括分泌Th1类细胞因子。

优选的，所述Th1类细胞因子选自IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-8等。

优选的，分离发生特异性反应的T淋巴细胞，其特异性识别权利要求1或2的 EBNA1表位肽，并能够在识别后发生特异性反应。