[发明专利]一组结核潜伏感染诊断标志物及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一组结核潜伏感染诊断标志物及其用途。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，被列为我国重大传染病之一。目前结核分枝杆菌感染人群基数大，发病率高，至今尚无有效的快速血清学诊断方法，给结核病防治工作带来了严峻挑战。因此，在结核病疫情控制面临严峻挑战的今天，筛选结核病新型生物标志候选物，寻求一种新的诊断技术、新药和新疫苗的开发已迫在眉睫。

结核病是一种由结核分枝杆菌引起的严重危害人类健康的传染性疾病。人类对结核分枝杆菌普遍易感，据WHO统计全球有三分之一的人感染过结核分枝杆菌，每年约有200万患者死于结核病。但感染结核分枝杆菌的人群只有10％左右的人发展成为活动性结核病，绝大多数的人体内的细菌以一种潜伏感染的状态存在，人体的免疫机制使细菌处于生长抑制或停止状态，保护机体免于发病。对于那些没有临床表现的感染者，有相当数量的一部分人体内存在潜伏感染的结核分枝杆菌，即结核分枝杆菌感染后的一种亚临床状态，无临床症状、无细菌学依据、无放射检查征象、PPD皮试和/或T-Spot阳性。机体的免疫系统能够控制结核分枝杆菌的复制而不表现出临床症状但又不能彻底清除感染的结核分枝杆菌。结核分枝杆菌在不利于其生长的情况下停止复制但保持活力，在机体免疫力低下等情况下能重新复制并导致临床症状。因此，寻找结核分枝杆菌潜伏感染的新型生物标记物对于早期发现潜伏感染者，采取相应措施使潜伏感染者不发病或在其发展为活动性结核病前期进行干预具有积极意义。

目前诊断结核潜伏感染常用的方法有：1.结核菌素皮肤试验：长期以来结核分枝杆菌潜伏感染的诊断依靠结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test，TST)，它是使用PPD和OT为主的结核菌素作为包被抗原进行皮内注射的诊断方法，此法简单易行，应用于结核病的诊断、筛查以及流行病学研究已超过100年，目前仍然作为发现潜伏感染者的主要检测手段，但其最大的缺点在于PPD及OT中的大多数蛋白质与其他分枝杆菌和无关细菌相同。因此，在卡介苗接种率和非结核分枝杆菌感染率较高的地区，TST方法的特异度较低。该方法以某数值为界来判断某人是否存在结核分枝杆菌潜伏感染。不同的界值可能会对个体的划分产生错误，影响方法的灵敏度和特异度。而且病人必须在注射后48～72h观察结果，可能导致门诊病人的失访。此外，急性感染性疾病、疫苗注射、免疫抑制剂的使用或免疫抑制性疾病、营养不良、结节病、肿瘤、其他难治性疾病和老年人等因素，可非特异性地影响试验结果而出现假阴性，影响诊断的准确性。2.干扰素-γ释放实验(GIRAs)：鉴于TST检测方法的局限性，近年来发展的以T细胞为基础的干扰素-γ释放实验为诊断结核分枝杆菌的潜伏感染带来新的希望。该方法原理是：被结核分枝杆菌抗原致敏的T细胞再遇到同类抗原时能产生干扰素-γ，产生高水平的干扰素-γ意味着结核分枝杆菌的感染。目前检测用抗原选自结核分枝杆菌基因组差异区1(RD1)基因编码的特异性蛋白，如早期分泌的抗原靶蛋白(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP10)，避免了与卡介苗和大多数非结核分枝杆菌抗原的交叉反应。GIRAs大大提高了反应的特异性。目前美国FDA已批准的QuantiFERON-TB和欧洲使用的T-SPOT-TB试验，都是以ESAT-6和CFP-10为抗原的GIRAs，可应用于结核杆菌感染，包括结核分枝潜伏感染和结核病的诊断。但是，IGRAs法具有费用高、需计数淋巴细胞等缺点，只能在具备相应条件的实验室进行。为了解决结核分枝杆菌潜伏感染的诊断和预防问题，许多学者努力从结核杆菌中分离和鉴定特异性抗原用作为结核分枝杆菌潜伏感染的筛查指标。经过国内外研究人员的大量研究，结核分枝杆菌感染的特异性抗原主要有免疫性蛋白MPT64；分泌性蛋白抗原：抗原85复合体抗原，即Ag 85A(也称P32、MPB44)、Ag 85B(也称a-Ag、MPB59)和Ag 85C，以及ESAT-6和CFP-10蛋白等；脂蛋白类抗原：38k Da，27k Da，16k Da抗原等；糖脂类抗原：脂阿拉伯甘露聚糖抗原，结核菌糖类脂抗原等。所发现在这些抗原中，除分泌性蛋白ESAT-6和CFP-10蛋白已在T-SPOT-TB试验中用于诊断结核病潜伏感染之外，目前未查阅到关于结核分枝杆菌潜伏感染的生物标志的相关报道。

发明内容