[发明专利]一组结核病相关的外周血淋巴细胞miRNA及其应用

说明书

本发明属于动物生化免疫技术领域，具体涉及一组结核病相关的外周血淋巴细胞miRNA及其应用。本发明的外周血淋巴细胞hsa‑miRNA可以作为早期检测外周血淋巴细胞miRNA。所述外周血miRNA为联合使用。相关外周血hsa‑miRNA序列分别如下所述：1)hsa‑miR‑374b‑5p miRNA的序列如SEQ ID NO:1所示；2)hsa‑miR‑625‑3p的序列如SEQ ID NO:2所示；3)hsa‑miR‑362‑5p的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明还公开了扩增上述hsa‑miRNA的三条引物序列。本发明的hsa‑miRNA可以作为早期检测人结核病的标志物使用。

技术领域

本发明属于动物生化免疫技术领域，具体涉及一组结核病相关的外周血淋巴细胞miRNA及其应用。本发明的外周血淋巴细胞hsa-miRNA组合物可以作为早期检测人结核病的标识物。

背景技术

结核病是人类最古老的传染病之一，至今依然是单一感染因素引起死亡人数最多的疾病，我国是全球22个结核高负担国家之一。因此提高对结核病的诊断水平对结核病的预防和治疗意义重大。通常疑似结核患者要细菌学检测，抗酸检测，结核菌素试验(PPD试验)，胸部CT，血结核抗原抗体检测等，但这些方法耗时长，对样本保存条件要求高会检出率不高等缺陷，一直困扰结核病的诊断和治疗。所以结核病的分子生物学研究日益受到国内外的重视，希望从分子水平揭示结核病发生，发展，转移及转归，从而提高结核病的诊治水平。

microRNA(或称miRNA)，miRNA是近年来在多种真核细胞及病毒中发现的一类来源于内源性染色体的非编码单链调节RNA，长度约为22(18～25)个核苷酸，是由一段具有发夹环结构的长度为70～80核苷酸的单链RNA前体剪切后生成的短序列。miRNA以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，而且绝大部分定位于基因间隔区，其转录独立于其他基因，并不翻译成蛋白质，而是通过阻遏或降解相应的mRNA使蛋白质的表达水平发生变化，从而在体内代谢过程中起到多种调控作用。例如，有些miRNAs直接与靶基因碱基互补配对或不完全配对发挥作用，有些则需要和蛋白质结合后再发挥作用，但是它们的共性是不编码蛋白质，它们作为RNA分子直接发挥着调控作用。对这些miRNA进行深入的研究，将对深入理解生命本质以及人类疾病的防治具有重要的意义。

在感染性疾病中，人们发现感染的病毒或细菌能够通过基因沉默机制躲避宿主免疫系统的监视，并且可以依靠miRNA对抗宿主细胞的免疫反应。作为基因表达的调控因子，每个miRNA可以调节数百个靶基因，其在细胞增殖、分化、凋亡，发育、器官形成等一系列生命过程中发挥着重要作用。在结核病的发生发展机制中，miRNA不仅可以通过标记到基因上进行靶向调控，也可以通过高甲基化抑制免疫系统调控。如miRNA可以调控凋亡调节蛋白BCL2基因的编码，在结核分枝杆菌无毒菌株侵染的情况下，刺激巨噬细胞凋亡，可避免细菌逃离免疫系统识别。

近年来大量研究证明miRNA在外周血淋巴细胞中稳定表达，且组织细胞内外的miRNA的表达谱是不一样的，miRNA选择性的释放到外周血中，这种选择性机制对体液miRNA作为疾病诊断的潜在性无创生物标识物起着重要的作用。miRNA在血液中可长期稳定存在，RNA酶降解煮沸、反复冻融、酸碱环境、长期保存等各种处理方法均不会造成外周血miRNA的损失，正是外周血淋巴细胞miRNA良好的稳定性，为循环miRNA的检测，及其在科学研究和临床上的应用打下了良好的基础。

在众多miRNA中，hsa-miR-374b-5p、hsa-miR-625-3p和hsa-miR-362-5p在胃癌，食道癌，乳腺癌，非小细胞癌和直肠癌中表达异常并可能参与癌症的进程，且有报道显示hsa-miR-374b-5p、hsa-miR-625-3p和hsa-miR-362-5p在免疫应答中起重要作用，然而本领域仍不知道其在结核病发生中的具体情况，还没有报道对其在结核患者外周血中的作用进行研究和开发。

发明内容