[发明专利]马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1及其应用。

背景技术

马氏珠母贝（Pinctadamartensii）是我国人工海水育珠的主要珍珠贝之一，近年 来因沿海水质的日趋恶化，各种病害也频繁发生，导致马氏珠母贝因病害发生大量死亡，对 我国珍珠产业造成了巨大的经济损失。因此，了解马氏珠母贝免疫机制并在此基础上提高 马氏珠母贝抗胁迫能力是目前亟需解决的问题。

无脊椎动物，不具备高等动物的特异性免疫系统，所以对于天然免疫分子凝集素 （Lectin）在体内发挥免疫功能十分重要。凝集素普遍存在于生物体中，有糖基结合位点，是 一种专一性很强的糖蛋白或是结合糖的蛋白，能够结合游离在溶液中的糖或是蛋白的某部 分，因具有凝聚血红蛋白的功能，故而命名为凝集素。动物凝集素按照凝集素序列特征和生 物学功能特点主要分为C-型凝集素、S-型凝集素、P-型凝集素、I-型凝集素和五聚体凝集素 这五大类。其中，C-型凝集素是指活性必须依赖于Ca²⁺才能发挥作用，存在于所有后生动物 中。C-型凝集素的分布比较广泛，在动物、植物、微生物，甚至病毒中都有发现C-型凝集素的 CRD结构域的蛋白。具有糖结合位点使得C-型凝集素在生物学上发挥了很多重要作用，如细 胞粘附、内吞作用以及免疫识别等功能。目前，关于马氏珠母贝凝集素的研究比较少，胡钰 婷从马氏珠母贝中克隆得到PoLEC-1和PoLEC-2共2个C-型凝集素基因，但是凝集素在马氏 珠母贝免疫系统中的作用还未见深入报道。研究马氏珠母贝的凝集素不仅可以了解马氏珠 母贝的免疫机制，做到疾病防治，还间接对人类的生活有重要意义。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种马氏珠母贝凝集素PmCLEC- 1。

本发明的另一个目的是提供一种马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1基因。

本发明的另一个目的是提供马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。

一种马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:2或3所示。SEQ IDNO:2所示序列为凝集素PmCLEC-1基因的DNA全长序列，全长636bp，包含39bp的5'UTR， 147bp的3'UTR。SEQIDNO:3所示序列为凝集素PmCLEC-1基因的开放阅读框序列，开放阅读 框450bp，编码149个氨基酸。

本发明还提供所述马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1在抑制大肠杆菌和藤黄微球菌生 长中的用途。

另外，本发明设计了一对检测如上所述马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1基因的荧光定 量引物，用于分析马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1基因在各组织中的表达情况，因此本发明要 求保护一对检测如上所述马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1基因的荧光定量引物，引物的核苷酸 序列如SEQIDNO:4~5所示。

本发明还保护包含SEQIDNO:2或3所述马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1基因的重组 载体。本发明还保护包含如上所述重组载体的重组菌。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明以马氏珠母贝为研究对象，运用高效液相色谱仪对其血清进行分离纯化，筛选 出具有抑菌活性的蛋白，所获得马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1能明显抑制大肠杆菌和藤黄微 球菌的生长，通过质谱测序，采用RACE技术克隆cDNA全长，获得编码马氏珠母贝凝集素 PmCLEC-1的基因，其核苷酸序列如SEQIDNO：2或SEQIDNO：3所示；马氏珠母贝凝集素 PmCLEC-1基因cDNA全长636bp，包含39bp的5'UTR，147bp的3'UTR。SEQIDNO:3所示序列为 凝集素PmCLEC-1基因的开放阅读框序列，开放阅读框450bp，编码149个氨基酸。

研究细菌刺激之后凝集素的mRNA在血淋巴中的时序表达，发现经过细菌刺激之 后，PmCLEC-1处于12h在血淋巴中表达含量最高，与其它时期具有显著差异。之后下调，到 24h又上调一些，其它时间段都没有什么变化。与马氏珠母贝PoLEC1相比，它的变化明显。说 明了PmCLEC-1参与了免疫作用，与免疫相关，本发明的马氏珠母贝凝集素PmCLEC-1具有抑 制大肠杆菌和藤黄微球菌生长的作用。