[发明专利]一种核酸提取方法及其专用试剂盒

说明书

本发明公开了一种核酸提取方法及其专用试剂盒。本发明提供的方法包括如下步骤：(1)取样本液，与A组分混合并反应；A组分包括氢氧化钠和二硫苏糖醇；(2)取反应体系，与B组分混合，得到核酸提取物；B组分为B‑1组分或B‑2组分；B‑1组分包括硫酸氢钠；B‑2组分包括海藻糖和甘露醇。本发明提供的试剂盒，包括A组分和B组分；A组分包括氢氧化钠和二硫苏糖醇；B组分为B‑1组分或B‑2组分；B‑1组分包括硫酸氢钠；B‑2组分包括海藻糖和甘露醇。本发明提供的方法具有如下优点：步骤简单；成本低廉；反应条件温和；试剂保存容易；所得到的核酸提取物无需纯化步骤即可应用于后续扩增反应，几乎不会造成核酸的损失，便于集成到微流控芯片内。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种核酸提取方法及其专用试剂盒。

背景技术

目前，在临床或科研领域中常规核酸提取方法包括物理法、化学法、酶法以及上述方法的组合。物理法包括煮沸、冻融、微波、超声、颗粒破碎等。化学法为采用十二烷基硫酸钠(SDS)、Trixon、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、螯合树脂、吐温20等裂解后进行提取。酶法为采用蛋白酶K、溶菌酶、植物蛋白酶等裂解后进行提取。

文献1(CN101851617B)、文献2(CN103820431A)和文献3(CN104450684A)公开了用磁珠法提取病毒或细菌中核酸的试剂盒及提取方法。该方法主要是通过裂解液将病毒或细菌破碎，破碎后通过磁珠吸附游离的核酸形成磁珠-核酸复合物，并在配合磁场的作用下完成核酸的纯化。该方法提取的核酸纯度高、完整、可直接用于后续检测，但是存在核酸提取时间较长、操作步骤复杂、成本昂贵，并在利用磁场-磁珠反复纯化核酸的过程中造成核酸流失等问题。

文献4(CN104611324A)公开了一种全血样本快速裂解试剂盒及其检测方法。该方法用月桂酰基肌氨酸钠、二硫苏糖醇、pH7.4的TE，95℃孵育2min，并将反应产物在12000rpm离心3min，收集上清取得了全血样本的核酸提取物。其优点为提取的核酸可直接用于聚合酶链式反应(PCR)检测。但是该方法存在整个裂解过程需要95℃高温加热，并且裂解产物需要离心取上清的纯化步骤，其裂解条件苛刻、较为繁琐，不易被集成到微流控芯片中。

文献5(Chelex-100法和碱性裂解法提取细菌DNA的比较)公开了用Chelex-100法和碱性裂解法从大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中提取核酸的一种方法。Chelex-100法用提取液(5％Chelex-100，1mmol/L EDTA，1％TritonX-100)，56℃水浴30min，95℃加热10min；4℃、12000g离心3min，取上清即为DNA模板。碱裂解法用1mol/LNaOH 100μl 37℃孵育30min，12000g离心2min，加入1mol/L HCL 100μl，12000g离心3min，取上清即为DNA模板。两种方法核酸提取步骤复杂，并且提取的核酸不能直接用于后续扩增，需要离心等步骤，才可以进行后续扩增反应。

不论是上述文献中提到的磁珠法、热裂解、碱裂解的核酸提取方法，还是其他常规核酸提取方法均普遍存在步骤繁琐、耗时长，价格昂贵、试剂保存条件苛刻，以及核酸提取物不能直接用于后续核酸扩增，并且难以集成到微流控芯片上等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种核酸提取方法及其专用试剂盒。

本发明提供了一种核酸提取方法，包括如下步骤：

(1)取样本液，与A组分混合并反应，形成反应体系；所述A组分包括氢氧化钠和二硫苏糖醇；

(2)完成步骤(1)后，取反应体系，与B组分混合，得到核酸提取物；所述B组分为B-1组分或B-2组分；所述B-1组分包括硫酸氢钠；所述B-2组分包括海藻糖和甘露醇。

所述步骤(1)的所述反应中，氢氧化钠的浓度为0.01mol/L-0.05mol/L，二硫苏糖醇的浓度为0.001mol/L-0.01mol/L。