[发明专利]亚硝酸盐检测荧光检测探针以及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及有机化学领域，具体涉及亚硝酸盐检测荧光检测探针及检测方法。

背景技术

食品添加剂的过度使用是食品安全问题的一个重要方面，近年来，公众食品安全 意识明显增强。亚硝酸盐作为一种常用的食品添加剂，广泛存在于乳制品、肉类及泡菜等腌 制食品中。但是，食品中过量的亚硝酸盐被人体摄入以后，会对人体健康构成严重危害。亚 硝酸盐在食品中的过度添加和残留引起了人们的普遍关注，因而，建立一种快捷、高效、准 确、灵敏的亚硝酸盐检测方法尤为重要。

传统的亚硝酸盐检测方法是盐酸萘乙二胺分光光度法，但该方法灵敏度低，选择 性差。近年来，荧光光度法因具有灵敏度高、选择性好、检测限低、仪器设备简单、操作简便 等诸多优点，备受关注，荧光光度法作为一种快速、廉价、灵敏的检测技术得到广泛关注。荧 光光度法检测亚硝酸盐主要是基于荧光探针与亚硝酸盐的特异性反应。

但是目前市场上尚无亚硝酸盐检测荧光探针，开发一种检测快速、高效、灵敏的亚 硝酸盐荧光探针以解决传统亚硝酸盐检测技术的不足成为当务之急。

发明内容

本发明的目的是提供一种亚硝酸盐检测荧光检测探针。

本发明的再一目的是提供亚硝酸盐检测荧光检测方法。

本发明的再一目的是提供亚硝酸盐检测荧光检测方法，以解决传统亚硝酸盐检测 技术灵敏度低，选择性差的缺点。

根据本发明的荧光检测探针，其结构式如式I所示:

制备上述荧光检测探针的方法包括步骤：

1)以7-羟基香豆素为起始原料，在七号位引入烷基基团；

2)在三号位引入卤素基团；

3)在有钯/铜催化剂存在的条件下引入1,4-二氢吡啶环，取代卤素基团。

其合成路线为：

本发明的荧光检测探针的检测原理为：探针化合物本身荧光强度很弱，亚硝酸盐 在酸性条件下生成一氧化氮(NO)，一氧化氮与探针化合物发生自由基反应，使其发生芳构 化，生成强荧光的的吡啶衍生物。反应前后荧光强度的变化与亚硝酸盐的浓度之间呈线性 关系，从而可定量检测亚硝酸盐的含量。

为了实现上述目的，根据本发明的具体实施方式，本发明的亚硝酸盐检测荧光检 测方法包括步骤：

(1)将待测食品样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，得样品提取液；

(2)将步骤(1)得到的提取液在pH<3.0的酸性条件下与荧光探针于60℃水浴中反 应30min；

(3)将步骤(2)得到的反应液用NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲液调节pH至6.0～8.0，用荧光 分光光度计测定荧光强度；

(4)配置亚硝酸盐标准溶液，将其与荧光探针反应后，测定荧光强度，荧光强度对 应亚硝酸盐含量作校正曲线进行定量分析；

(5)依据步骤(4)得到的校正曲线计算得到食品样品中的亚硝酸盐含量。

优选地，最大激发波长为390nm，最大发射波长为458nm。

本发明检测食品中亚硝酸盐的方法，检测限为0.02μmol·L^-1。亚硝酸钠标准溶液 在0.2～4.5μmol·L^-1浓度下，荧光强度与亚硝酸盐浓度呈良好的线性关系，相关系数大于 0.998，被测物中亚硝酸盐的回收率在93.3～103.5％，相对标准偏差(RSD)<3.1％。与现有 技术相比，本发明的有益效果是：根据本发明的检测亚硝酸盐的方法，该荧光探针在酸性条 件下，对亚硝酸盐具有独特的识别性能，生成相应吡啶类衍生物的性质，通过检测作用前后 荧光性质的改变来实现对亚硝酸盐的定量检测。本发明的亚硝酸盐检测方法相对于现有技 术灵敏度和准确度更高，选择性更好。

附图说明

图1为荧光探针与亚硝酸盐反应前后的荧光光谱；

图2为荧光探针与一系列浓度的亚硝酸钠标准溶液反应后的荧光光谱。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。

实施例1制备亚硝酸盐检测荧光探针

基于sonogashira反应制备荧光探针，合成过程如下：