[发明专利]一种抗肿瘤干细胞抗原OCT4特异性CTL及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生命科学技术领域，尤其涉及一种抗肿瘤干细胞抗原OCT4特 异性CTL及其制备方法。

背景技术

在我国，恶性肿瘤已成为危害人类健康的重要疾患之一，每年发病率为 235.23/10万人，死亡率为148.81/10万。近年来随着科技，医学诊断和治疗 水平的发展和提高，但肿瘤的总体死亡率和生存率仍无明显改善，复发和转移依 然是导致癌症预后不佳的主要原因。随着对肿瘤生物学特性的深入研究，目前认 为一些恶性实体肿瘤(脑胶质瘤、肺癌、乳腺癌和大肠癌等)是一种干细胞疾病， 即肿瘤来源于肿瘤干细胞，肿瘤干细胞又称为肿瘤起始细胞。这类细胞仅占整个 肿瘤细胞一小部分，但是具有自我更新能力和多向分化潜能，是形成不同分化程 度的肿瘤和肿瘤不断生长的根源，可能是肿瘤治疗失败的根源。进一步研究发现， 肿瘤干细胞不仅较其他肿瘤细胞更具转移潜能，而且对化疗、放射更具抗性。因 此，如何杀灭整个肿瘤内的干细胞以获得肿瘤稳定而长久的退缩，甚至治愈是目 前肿瘤学领域研究的热点和重点。近期有多项研究报道Oct4在多种恶性肿瘤组 织或细胞系中异常表达，提示Oct4除了活跃于干细胞的生长过程，还极有可能 参与成体细胞及肿瘤的发生过程，这为Oct4与恶性肿瘤的相关性研究提供了思路 和方向。

Oct4是Pit-Oct-Unc(POU)转录因子家族的成员之一，由POU5F1基因编码产生的，定位于6号染色体上(6p21.31)，长度为16.40kb，属于类蛋白。Oct4基因就是其中一个关键基因，也被称为Oct3、POU5F1、OTF3或OTF4，是POU转录因子家族中的一员。Oct4能维持胚胎干细胞的未分化状态并促进其不断增殖，而它在肿瘤的发生、增殖及分化过程中起着一定作用。研究发现，Oct-4的异常高表达可增加干细胞转变为恶性肿瘤细胞潜能，而抑制其表达则可以抑制恶性肿瘤的发生、发展，并且Oct-4表达水平的高低和生殖系统肿瘤的恶性程度有显著的正相关性。OCT4仅在肿瘤干细胞中存在，而肿瘤干细胞是存在的极少量的具有自我更新、高致瘤力、侵袭力及耐药性的原始未分化细胞。对维持肿瘤干细胞自我更新、致瘤力、侵袭力及耐药性等特性有重要作用，靶向OCT4的治疗将为消灭肺癌干细胞提供新思路。针对肿瘤干细胞的新型疗法将与现有手术、化疗、放疗等传统方法相结合，给癌症患者带来新的希望和福音。因此，以OCT4为靶点的针对肿瘤干细胞的靶向治疗将具有重要的临床意义。一方面，可能作为临床上提供判断肿瘤预后的分子指标；另一方面，可以利用其作为分子靶基因进行抗肿瘤治疗，来克服肿瘤放化疗的抵抗性，提高肿瘤的治疗疗效。

在人类抗癌历史上，与癌症抗争有过三大利器：外科手术，化疗，与放射治 疗。至此，免疫科学家斯坦曼利用先前发现的树突状细胞(Dendriticcell,DC)， 激发自身的免疫力清除肿瘤，利用自己的研究成果，将生命由预期的数月延长到 四年。由于他对免疫领域的贡献在2011年获得诺贝尔生理医学奖，在肿瘤领域并 开创了一个新的天地——肿瘤免疫细胞治疗。他的研究成果现在已经广泛应用于 临床，已经成为继手术、放、化疗后的第四种癌症治疗方式。由于肿瘤免疫细胞 治疗能够联合手术、化疗、放疗精准清除残余肿瘤细胞，防止复发和转移，加强 免疫监视作用，提升患者生存质量和时间，并且没有放化疗的毒副作用和手术的 巨大伤害。近年来，在临床应用中受到越来越广泛的关注，是国内外研究的热点， 已被公认为是最具前景的肿瘤治疗方法。

过继性免疫细胞治疗是指通过输入自身或同种异体的肿瘤杀伤细胞来治疗 肿瘤的方法。它不仅可以纠正细胞免疫功能的低下，促进宿主抗肿瘤免疫的功能， 还可以直接发挥抗肿瘤的作用。其中细胞毒性T细胞的过继治疗有着特殊的优 越性。细胞毒性T细胞的过继治疗是实体肿瘤，尤其是肿瘤相关抗原比较明确 的恶性黑色素瘤、结直肠癌、肝癌、前列腺癌、肺癌等的研究热点。特异性CTLs(细 胞毒性T细胞)的产生是通过将肿瘤抗原负载成熟的DC(树突状细胞)刺激T 细胞从而获得抗原的特异性CTL克隆。这种CTL能识别并杀伤携带相应肿瘤抗 原的恶性细胞，经过大量的扩增就能应用于临床治疗。这种治疗方法相比其他的 治疗方法具有易获得、可操作性强，靶向性好，安全性高等特点。