[发明专利]一种抗肿瘤干细胞抗原OCT4特异性CTL及其制备方法

权利要求书

1.一种抗肿瘤干细胞抗原OCT4特异性CTL的制备方法，其特征在于，包括以 下步骤：

步骤一，制备包裹有肿瘤干细胞抗原OCT4的靶向树突状细胞C-型凝集素受体 的阳离子脂质体载体；

步骤二，利用所述步骤一得到的阳离子脂质体载体将肿瘤干细胞抗原OCT4负 载于成熟DC细胞；

步骤三，利用所述步骤二得到的成熟DC细胞诱导得到OCT4特异性T淋巴细 胞和中枢性记忆性T淋巴细胞。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中具体包括以下 步骤：

步骤1，提供聚乙二醇衍生化乙醇胺磷脂，将C-型凝集素类型的糖连接在聚乙二 醇衍生化乙醇胺磷脂，得到C-型凝集素类型的糖修饰的聚乙二醇衍生化乙醇胺 磷脂；

步骤2，将阳离子脂和步骤1中得到的C-型凝集素类型的糖修饰的聚乙二醇衍 生化乙醇胺磷脂分别溶解于氯仿和甲醇的混合溶剂中，得到混合液；

步骤3，用旋转蒸发仪将步骤2中得到的混合液旋转蒸干，使之形成一层均匀的 薄膜，真空干燥后加入含有肿瘤干细胞抗原OCT4的PBS缓冲液或纯水放置4℃ 超声水化，挤压过膜后得到包裹有肿瘤干细胞抗原OCT4的靶向树突状细胞C- 型凝集素受体的阳离子脂质体载体。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二中具体包括以下 步骤：

步骤1，将外周血单个核细胞悬于基础培养基并加入DC细胞诱导培养基，种于 细胞培养板，在37℃，5％CO₂，饱和湿度下培养进行DC细胞诱导；

步骤2，向DC细胞中加入适量的所述步骤一得到负载有肿瘤干细胞抗原OCT4 的阳离子脂质体载体，共孵育培养6小时；然后加入DC促成熟培养基，继续培 养24-48小时，即得到负载肿瘤干细胞抗原OCT4的成熟DC细胞。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中具体包括以下 步骤：

步骤1，将所述步骤二中获得的成熟DC细胞诱导T细胞，诱导后的T细胞与工 程细胞混合培养，添加细胞因子培养；

步骤2，根据细胞密度隔天补加含有细胞因子的培养基，使细胞维持一定范围的 密度生长，直到2-3周，收获细胞，得到OCT4特异性T淋巴细胞和中枢性记 忆性T淋巴细胞。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述阳离子脂质体包括磷脂 酰乙醇胺双分子层、聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺以及甘露糖。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述磷脂酰乙醇胺双分子层 由磷脂酰乙醇胺阳离子脂和聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺分子组成。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生化磷脂酰 乙醇胺与所述甘露糖形成甘露糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺磷脂。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤一中所述肿瘤干细胞抗 原OCT4选自HLA-A0201限制性肿瘤干细胞抗原OCT4表位肽15肽，如SEQ NO.2所示；或人工合成的、改造的或突变的OCT4抗原肽。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述工程细胞为人工细胞转 染了人4-1BBL和IL-21的K562细胞株。

10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述细胞因子选自人重组 细胞因子IL-2、IL-12和IL-18细胞因子。

11.根据权利要求1-10任意一项制备方法所制备得到的特异性CTL。

12.如权利要求11所述的特异性CTL在制备抗肿瘤药物中的应用。