[发明专利]一种基于ELISA检测DNA-蛋白交联体的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，具体涉及一种与诊断相关的基于ELISA方法检测在某 些理化因素作用下，直接或间接产生的DNA-蛋白交联物的试剂盒。

背景技术

生物机体中，DNA-蛋白的相互作用，如DNA聚合酶、RNA聚合酶、转录因子、DNA损伤 修复蛋白等与基因组DNA非共价结合的相互作用(non-covalentinteraction)，在细胞增 殖和维持遗传基因的完整性等方面发挥了重要作用。然而，药/毒物暴露下形成的共价结合 (Covalentinteraction)的交联型DNA-蛋白复合体(DNA-Proteincrosslinkingcomplex， DPC)，由于阻碍了DNA的复制和转录，是一种严重的DNA损伤方式。甲醛，辐射，氮芥，顺 铂等都可以引起DPC生成，并引起细胞增殖旺盛的组织，如骨髓、肿瘤等的药物敏感性增加 (WongVC,CashHL,MorseJL,LuS,ZhitkovichA:S-phasesensingofDNA-protein crosslinkstriggersTopBP1-independentATRactivationandp53-mediatedcelldeath byformaldehyde.CellCycle2012,11:2526-37.IdeH,ShoulkamyMI,NakanoT, Miyamoto-MatsubaraM,SalemAM:RepairandbiochemicaleffectsofDNA-protein crosslinks.MutatRes2011,711:113-22.)。DPC致细胞损伤和基因突变的毒性效应已经 得到确证(NakanoT,OuchiR,KawazoeJ,PackSP,MakinoK,IdeH:T7RNApolymerases backedupbycovalentlytrappedproteinscatalyzehighlyerrorpronetranscription. JBiolChem2012,287:6562-72.NakanoT,MitsusadaY,SalemAM,ShoulkamyMI,Sugimoto T,HirayamaR,UzawaA,FurusawaY,IdeH:InductionofDNA-proteincross-linksby ionizingradiationandtheireliminationfromthegenome.MutatRes2015,771:45-50. NakanoT,Miyamoto-MatsubaraM,ShoulkamyMI,SalemAM,PackSP,IshimiY,IdeH: TranslocationandstabilityofreplicativeDNAhelicasesuponencountering DNA-proteincross-links.JBiolChem2013,288:4649-58.)，近年来在DPC损伤修复机 制上也有一些突破性的进展，如最近《Cell》发表文章，证实DPC可以通过复制依赖的水解 酶修复(DuxinJP,DewarJM,YardimciH,WalterJC:RepairofaDNA-proteincrosslink byreplication-coupledproteolysis.Cell2014,159:346-57.StingeleJ,SchwarzMS, BloemekeN,WolfPG,JentschS:ADNA-dependentproteaseinvolvedinDNA-protein crosslinkrepair.Cell2014,158:327-38.)。但总的说来，DPC在作用机制尚有诸多不明 之处。较其它的DNA损伤方式，如核酸碱基上加合烷化物、联间/内交联形成等，DPC引起的 细胞损伤，突变效应更严重，修复更加困难。检测细胞或组织样本中总DPC(TotalDPC,T-DPC) 水平对于研究DPC的形成及细胞损伤修复机制，临床评估药物敏感性等有重要意义。