[发明专利]一种纤维寡糖的单体制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及纤维寡糖的技术领域，特别涉及一种纤维寡糖的单体制备方法。

【背景技术】

纤维寡糖，又称纤维低聚糖，是由2～10个葡萄糖通过β-1，4-葡萄糖苷键 结合而成的低度聚合糖类，可促进矿物质吸收、为双歧杆菌增殖因子、降低血 清胆固醇、增强机体免疫力、抵抗肿瘤等独特的生理功能，是人、动物、植物 等具有特殊生理作用的低聚糖，可广泛应用于食品和饲料工业。其中聚合度高 于8的纤维寡糖溶解度极低或不溶，纤维寡糖是由纤维二糖至纤维八糖组合而 成的混合物，并含有少量的葡萄糖。

目前，在纤维寡糖的研究中，主要存在两个问题：一是纤维寡糖的定量方 法只能定量纤维寡糖总糖含量，而对纤维寡糖中不同聚合度的纤维寡糖的含量 不能定量，原因是缺乏不同聚合度纤维寡糖的标准样品；二是纤维寡糖是重要 的双歧因子，而目前研究纤维寡糖对双歧杆菌的增殖作用尚停留在纤维寡糖混 合物对双歧杆菌的整体增殖作用，而不同聚合度纤维寡糖对双歧杆菌增殖作用 的构效关系尚不明确，因此，制备分离不同聚合度的纤维寡糖单一组分对双歧 杆菌增殖作用的构效关系对于纤维寡糖的研究和应用开发具有重要的意义。

因此，有必要提出一种纤维寡糖的单体制备方法，为后续的纤维寡糖准确、 科学的定量方法的建立和生理功能构效关系的研究提供材料。

【发明内容】

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种纤维寡糖的单体制 备方法，其旨在解决现有技术中纤维寡糖的定量方法只能定量纤维寡糖总糖含 量、纤维寡糖对双歧杆菌增殖作用限于纤维寡糖混合物对双歧杆菌整体增殖作 用，不同聚合度纤维寡糖单一组分的研究及应用开发尚不清楚的技术问题。

为实现上述目的，本发明提出了一种纤维寡糖的单体制备方法，包括如下 步骤：

步骤一、制备混酸：采用86.2％的甲酸和36％的盐酸按质量比为4：1的比 例混合后得到混酸，备用；

步骤二、水解制取纤维寡糖：在具塞锥形瓶中加入固液比为1：24的脱脂 棉和经步骤一制得的混酸，并将具塞锥形瓶放置在恒温水浴锅中水解处理，得 到含有纤维寡糖的水解液；

步骤三、过滤水解液：经步骤二水解处理后，将具塞锥形瓶中的水解液倒 入G5漏斗中，过滤除去水解液中的不溶物，得到含有纤维寡糖的滤液；

步骤四、回收并中和混酸：将步骤三得到的滤液放置在旋转蒸发仪上回收 甲酸和盐酸，再用氢氧化钠中和滤液中的剩余酸；

步骤五、再次过滤：将步骤四处理后的滤液再次过滤，得到淡黄色含有不 同聚合度的粗纤维寡糖溶液；

步骤六、一次分离：将经步骤五得到的粗纤维寡糖溶液在AKTAExplorer 层析系统上分离，以XK16/100为层析柱，以Bio-GelP2凝胶为分离介质，用 示差折光检测器检测，采用洗脱液洗脱，进行纤维寡糖溶液的第一次分离，得 到较高含量纤维三糖至纤维六糖的不同组分；

步骤七、二次分离：将步骤六得到的较高含量纤维三糖至纤维六糖的不同 组分分别在AKTAExplorer层析系统上进行二次分离，得到高纯度不同聚合度的 纤维寡糖单一组分。

作为优选，所述的步骤二中的恒温水浴锅的温度设定为65±1℃。

作为优选，所述的步骤二中的水解时间为10h。

作为优选，所述的步骤六中的层析柱的柱温设定为48℃，洗脱液为脱气超 纯水，洗脱速度为0.5mL/min。

作为优选，所述的步骤六中在AKTAExplorer层析系统上的上样纤维寡糖总 糖浓度为68.62g/L，上样量为200mL。

作为优选，所述的步骤七的二次分离以XK16/100为层析柱，以聚丙烯酰 胺凝胶Bio-GelP2为分离介质，用示差折光检测器检测，采用脱气超纯水洗脱。

作为优选，所述的层析柱XK16/100的柱温设为48℃。

作为优选，所述的脱气超纯水的洗脱速度为0.5mL/min。