[发明专利]分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法。

背景技术

卡泊三醇是维生素D的衍生物，能抑制皮肤细胞(角朊细胞)的过度增生和诱导其分化，从而使银屑病皮肤细胞的增生及分化异常得以纠正，是对寻常型银屑病的局部治疗。

卡泊三醇中间体F是合成卡泊三醇的一个重要的中间体，其结构式如下：

为了控制卡泊三醇中间体F的质量，需要对卡泊三醇中间体F及其杂质进行分离测定。在合成卡泊三醇中间体F时，会产生杂质VD2、E、D和F的异构体F’，它们的结构式如下：

目前还没有公开的方法报道分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法。因此开发一种分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法对于实现对卡泊三醇中间体F的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法，用高效液相色谱法分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质，能够实现中间体F与其对映异构体杂质的有效分离，同时也能与其他杂质有效分离，还能够准确测定F及其杂质的含量，专属性强，灵敏度高；该操作方法简单，具有简便、快速的优点。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇和乙酸乙酯的混合溶液为流动相进行固液分离，F结构式如下所示：

进一步，所述杂质包括VD2、E、D和F的异构体F’的一种或多种，如以下结构式所示：

进一步，所述流动相中甲醇和乙酸乙酯的体积比为7-9.5：1-2。

作为一种优选，所述流动相中甲醇和乙酸乙酯的体积比为9：1。

本发明的目的之二在于提供一种利用高效液相色谱法分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法，采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇和乙酸乙酯的混合溶液进行洗脱，进入检测器进行检测；所述流动相中甲醇和乙酸乙酯的体积比为7-9.5：1-2。

所述色谱法包括高效液相色谱、液质联用色谱、薄层色谱。

进一步，所述杂质包括VD2、E、D和F的异构体F’的一种或多种。

进一步，所述色谱柱的规格为4.0×250mm,5μm。

进一步，所述流动相的流速为1.5ml/min。

进一步，所述检测器为紫外检测器，所述检测器的波长为270nm。

进一步，利用高效液相色谱法分离测定卡泊三醇中间体F及其杂质的方法中所述杂质包括VD2、E、D和F的异构体F’，包括以下步骤：

1)分别取待测样品卡泊三醇中间体F及其杂质VD2、E、D和F的异构体F’的对照品，用稀释剂溶解制成待测样品及所述各杂质的对照溶液，分别取待测样品卡泊三醇中间体F及其各杂质对照溶液进样，进行高效液相色谱分析，确定待测样品卡泊三醇中间体F及其各杂质的保留时间；

2)取供试品加稀释剂制成供试品溶液，再取稀释剂作为空白溶液，分别取供试品溶液及空白溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按限度法根据供试品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积比较杂质VD2、E、D和F的异构体F’的含量。

具体地，针对所述F及其杂质VD2、E、D和F的异构体F’进行分离测定时，包括以下步骤：

1)杂质VD2对照溶液：取VD2对照品，加乙酸乙酯溶解后加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2)杂质E对照溶液：取杂质E对照品，加乙酸乙酯溶解后加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3)杂质D对照溶液：取杂质D对照品，加乙酸乙酯溶解后加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

4)F异构体F’对照溶液：精密称取异构体F’，加乙酸乙酯溶解后稀释至刻度，摇匀，即得。

5)F对照品溶液：称取F对照品，加乙酸乙酯溶解后加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

6)混合溶液：称取F对照品，加乙酸乙酯超声使溶解，再加入VD2对照溶液、杂质D对照溶液、杂质E对照溶液、异构体F’对照溶液、加稀释剂至刻度，摇匀，即得。

7)测定：分别取空白溶剂(稀释剂)、各杂质对照溶液、F对照品溶液、混合溶液，按有关物质色谱条件进样，记录色谱图，比较供试品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积。