[发明专利]用于修复卵巢功能的细胞制剂

说明书

技术领域

本发明涉及细胞工程技术领域，特别涉及一种用于修复卵巢功能的细胞 制剂。

背景技术

卵巢功能减退是指卵巢产生卵子能力减弱，卵泡质量下降，导致女性生 育能力下降及性激素缺乏。卵巢功能减退会进一步发展导致卵巢功能衰竭， 其中卵巢早衰是指妇女在40岁以前因某种原因引起的闭经、不育、雌激素缺 乏以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病。目前为止，除年龄因素引起 的生理性卵巢功能减退外，大多数病理性卵巢减退的病因仍不明确。临床上 治疗效果不佳，辅助生殖治疗成功率也较低。

目前有研究表明，采用干细胞制成的单一制剂能够促进卵巢细胞修复卵 巢，但干细胞只能在一定时间内恢复卵巢激素平衡，无法从根本上解决卵巢 功能衰退或持续保持卵巢激素平衡的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中采用单一细胞制剂修复 卵巢存在修复不稳定、不彻底等缺陷，提供一种能够彻底修复卵巢功能的混 合干细胞制剂。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种用于修复卵巢功 能的细胞制剂，包括羊膜间充质干细胞和卵巢细胞。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂中，所 述羊膜间充质干细胞的浓度为(1～5)×10⁵个/ml，所述卵巢细胞的浓度为(4～8) ×10⁵个/ml。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂还包括 肝素钠、白介素-6、白介素-3、干细胞因子、FMS样酪氨酸激酶3配体、血 红蛋白、成纤维细胞生长因子。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂中，肝 素钠的浓度为15-20ng/ml，白介素-6的浓度为10-20ng/ml、白介素-3的浓度 为10-20ng/ml、干细胞因子的浓度为30～70ng/ml、FMS样酪氨酸激酶3配体 的浓度为10-150ng/ml、血红蛋白的质量分数为1％～5％和成纤维细胞生长因子 的浓度为1-10ng/ml。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂还包括 壳聚糖、青霉素和链霉素。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述羊膜间充质干细 胞的来源过程包括以下步骤：

无菌环境下取羊膜，清洗后加入胰酶细胞消化液，水浴处理，离心后弃 上清，获得羊膜上皮细胞；用标准培养基重悬羊膜上皮细胞后进行培养，每 周换液1～3次；经胰酶细胞消化液消化后清洗并滤干，再次消化，离心并用 所述标准培养基重悬细胞后进行培养，每周换液1～3次，当细胞融合度达到 70％以上时，进行传代培养。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述标准培养基为含 有5～20％体积分数的FBS和双抗的DMEM培养基。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述卵巢细胞的来源 过程包括以下步骤：

取卵巢组织去除红细胞，加入胶原酶消化，吹打至组织块充分溶解，加 入培养基A充分混匀，离心弃上清，重悬细胞后过滤，对滤液再次离心弃上 清，加入培养基B进行培养，每2～3天换液一次，待细胞融合度至80％以上 时，停止传代，弃除培养基，清洗细胞，加入胰酶消化，待细胞变圆变亮后， 加入培养基A停止消化，并获得细胞悬液，离心弃上清，重悬细胞后，加入 培养基B进行传代培养。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述培养基A中添加 有胎牛血清、青霉素和链霉素。

在本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述培养基B中添加 有血清替代物、非必需氨基酸、谷氨酰胺、β-二硫基乙醇、β-FGF以及青霉 素和链霉素。

实施本发明提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂，可以达到以下有益效 果：通过采用羊膜间充质干细胞结合卵巢细胞共同制成细胞制剂，以及用于 防止羊膜间充质干细胞多向分化和促进羊膜间充质干细胞和卵巢细胞活性和 正常生长增殖的辅助性成分，同时，结合卵巢细胞，使得羊膜间充质干细胞 能够长期维持其干细胞特性，进而通过其分泌的细胞因子结合卵巢细胞共同 作用于卵巢，以达到即时、彻底修复卵巢功能的目的；避免单一细胞制成的 细胞制剂中，细胞性质不稳定，造成卵巢功能修复效果不稳定，修复效果差， 无法彻底修复卵巢等缺陷。

具体实施方式