[发明专利]用于修复卵巢功能的细胞制剂

权利要求书

1.一种用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，包括羊膜间充质干 细胞和卵巢细胞。

2.根据权利要求1所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于， 所述细胞制剂中，所述羊膜间充质干细胞的浓度为(1～5)×10⁵个/ml，所述 卵巢细胞的浓度为(4～8)×10⁵个/ml。

3.根据权利要求1所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于， 所述细胞制剂中还包括肝素钠、白介素-6、白介素-3、干细胞因子、FMS样 酪氨酸激酶3配体、血红蛋白和成纤维细胞生长因子。

4.根据权利要求3所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于， 所述细胞制剂中，肝素钠的浓度为15-20ng/ml，白介素-6的浓度为10-20ng/ml、 白介素-3的浓度为10-20ng/ml、干细胞因子的浓度为30～70ng/ml、FMS样酪 氨酸激酶3配体的浓度为10-150ng/ml、血红蛋白的质量分数为1％～5％和成纤 维细胞生长因子的浓度为1-10ng/ml。

5.根据权利要求1或3所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在 于，所述细胞制剂还包括壳聚糖、青霉素和链霉素。

6.根据权利要求1所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于， 所述羊膜间充质干细胞的来源过程包括以下步骤：

无菌环境下取羊膜组织，清洗后加入胰酶细胞消化液，水浴处理，离心 后弃上清，获得羊膜上皮细胞；用标准培养基重悬羊膜上皮细胞后进行培养， 每周换液1～3次；经胰酶细胞消化液消化后清洗并滤干，再次消化，离心并 用所述标准培养基重悬细胞后进行培养，每周换液1～3次，当细胞融合度达 到70％以上时，进行传代培养。

7.根据权利要求6所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于， 所述标准培养基为5～20％体积分数的FBS和双抗的DMEM培养基。

8.根据权利要求1所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，

所述卵巢细胞的来源过程包括以下步骤：

取卵巢组织去除红细胞，加入胶原酶消化，吹打至组织块充分溶解，加 入培养基A充分混匀，离心弃上清，重悬细胞后过滤，对滤液再次离心弃上 清，加入培养基B进行培养，每2～3天换液一次，待细胞融合度至80％以上 时，停止传代，弃除培养基，清洗细胞，加入胰酶消化，待细胞变圆变亮后， 加入培养基A停止消化，并获得细胞悬液，离心弃上清，重悬细胞后，加入 培养基B进行传代培养。

9.根据权利要求8所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于， 所述培养基A中添加有胎牛血清、青霉素和链霉素。

10.根据权利要求8所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于， 所述培养基B中添加有血清替代物、非必需氨基酸、谷氨酰胺、β-二硫基乙 醇、β-FGF以及青霉素和链霉素。