[发明专利]一种透明质酸酶细胞表面展示系统及其制备和应用

权利要求书

1.一种重组透明质酸酶细胞表面展示系统，其特征在于：将编码透明质酸 酶的基因hyl和负责跨膜定位和转运的冰核蛋白N端结构域的基因inaQ-N融合 得融合后的基因片段，表达于宿主细胞表面，得到透明质酸酶细胞表面展示系 统；

基因hyl具有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列；

基因inaQ-N具有SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组透明质酸酶细胞表面展示系统，其特征在于： 所述编码透明质酸酶的基因来源于兽疫链球菌，所述宿主细胞为Escherichiacoli 宿主菌。

3.一种权利要求1所述的重组透明质酸酶细胞表面展示系统的制备方法， 其特征在于：包括以下步骤：

(1)将SEQIDNO：1所示的编码透明质酸酶的基因hyl和SEQIDNO：2 所示的负责跨膜定位和转运的冰核蛋白N端结构域的基因inaQ-N融合，得融 合后的基因片段；

(2)验证融合后的基因片段的序列；

(3)将经验证的融合后的基因片段插入温度诱导型表达质粒中，得到重组 的温度诱导型表达质粒；

(4)将重组的温度诱导型表达质粒转化入宿主菌，转化有所述重组的温度 诱导型表达质粒的宿主菌成为所述重组透明质酸酶细胞表面展示系统；

(5)在温控诱导下使所述重组透明质酸酶展示在所述细菌细胞表面。

4.根据权利要求3所述的重组透明质酸酶细胞表面展示系统的制备方法， 其特征在于：步骤(3)中所述的温度诱导型表达质粒是指含有PL启动子的温 度诱导型表达质粒。

5.根据权利要求3所述的重组透明质酸酶细胞表面展示系统的制备方法， 其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)。

6.根据权利要求3所述的重组透明质酸酶细胞表面展示系统的制备方法， 其特征在于：步骤(5)中所述温控诱导的具体步骤为：

(Ⅰ)将转化有所述重组的温度诱导型表达质粒的大肠杆菌接种于培养基 中，在30-36℃下震摇培养10-14h；

(Ⅱ)将步骤(Ⅰ)中的细菌培养物以培养基体积的1-10％接种量转接于新 鲜培养基中，在30-36℃下震摇培养；

(Ⅲ)待步骤(Ⅱ)中的细菌培养液OD₆₀₀为0.6-0.9时，将培养温度升高 至39-42℃，继续震摇培养至培养液的OD₆₀₀为1.7-1.9；

(Ⅳ)收集(Ⅲ)中培养液中的细胞，重悬至磷酸盐缓冲液中保存于1-4℃ 即可。

7.重组透明质酸酶细胞表面展示系统在制备低分子量透明质酸和寡聚透明 质酸中的应用。