[发明专利]一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗用品技术领域，尤其涉及生物和医学检测用医疗用品技 术领域，具体涉及一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒及其制备 方法。

背景技术

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病，脓毒症和一些严重的感 染性疾病已成为发病和死亡的主要原因。测定感染最常用的传统指标有：降 钙素原、C反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等，但这些 指标都不同程度的存在滞后、敏感度低、特异性不高的缺陷。在感染性疾病 的预防和治疗中，如果能及早准确的诊断，就可以及早的采取合理的应对措 施，进而提高感染性疾病的治疗成功率。

肝素结合蛋白(heparin–bindingprotein,HBP)是中性粒细胞来源的颗 粒蛋白，是一个包含222个氨基酸的单链蛋白，当有细菌感染发生时，部分 细菌侵入到血管中，细菌本身或细菌释放的毒素刺激中性粒细胞释放HBP， 从而导致血中HBP含量升高。HBP与其它传统指标相比，除具有灵敏度高、 特异性强、阳性/阴性检出率高之外，还具有出现早，只在急性细菌感染时浓 度极度升高，而在病毒感染和非特异性炎症时保持较低的水平。因此，HBP 作为临床新的炎症标志物，具有早期、高特异性、高灵敏度的特点，明显优 于传统的标志物，在临床应用具有对病情的早期评估，预后评价，疗效观察 等价值，同时可以指导抗生素的应用，减少抗生素的滥用，减少耐药菌的发 生。因此，研究开发出一种快速、特异、敏感、准确的测定肝素结合蛋白的 浓度，具有重大的临床应用价值和经济意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒， 该试剂盒能够快速、特异、灵敏、准确地测定肝素结合蛋白。

同时，本发明的目的还在于提供一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白 用试剂盒的制备方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，包括第一缓冲液、第 二缓冲液和试剂卡；

所述第一缓冲液为含有0.83～2ng/μl兔抗人肝素结合蛋白抗体的磷酸盐 缓冲液；所述第二缓冲液为含有0.05～0.2μg/μl荧光标记的鸡抗兔二抗的磷 酸盐缓冲液；

所述试剂卡包括试纸条，所述试纸条包括塑料垫板，塑料垫板上设置硝 酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上左右间隔设置检测线和质控线，检测线左侧硝 酸纤维素膜上设置玻璃纤维素膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸， 玻璃纤维素膜上设置滤血膜；所述检测线上包被鼠抗人肝素结合蛋白抗体； 所述质控线上包被羊抗兔抗体。

所述试剂卡还包括外壳，所述外壳包括连接在一起的上盖和下盖，所述 上盖上设置有血样孔和检测窗；所述血样孔的位置对应滤血膜的位置；所述 检测窗的位置对应检测线和质控线的位置，使检测线和质控线处在检测窗中。

所述检测线上鼠抗人肝素结合蛋白抗体的包被量为0.2～0.8μg/cm。

所述质控线上羊抗兔抗体的包被量为0.5～1.4μg/cm。

所述荧光标记的鸡抗兔二抗为异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗。

所述检测线和质控线之间的间隔距离为5mm～10mm。

所述试纸条的宽度为3mm～6mm。

所述磷酸盐缓冲液的pH＝6.5～7.3，磷酸盐浓度为30～80mmol/L。

所述试剂盒的使用方法包括以下操作步骤：

Ⅰ：取不同浓度的肝素结合蛋白标准品加入到第一缓冲液中，然后再加 入第二缓冲液，混合均匀后加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置10～15min 后，将试剂卡插入荧光免疫读数仪，设定激发光波长为494nm，发射光波长 为518nm，读取不同浓度肝素结合蛋白标准品的荧光值，并将荧光值与肝素 结合蛋白的标准品的浓度值进行线性分析，绘制荧光值和肝素结合蛋白浓度 标准曲线，得到荧光值和肝素结合蛋白浓度关系式；

Ⅱ：取待测样品加入到第一缓冲液中，然后再加入第二缓冲液，混合均 匀，加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置10～15min，将试剂卡插入荧光 免疫读数仪，设定激发光波长为494nm，发射光波长为518nm，读取待测样 品的荧光值，将该荧光值带入步骤Ⅰ得到的关系式中，计算得到待测样品肝 素结合蛋白的浓度。

所述试剂盒储存在4～8℃环境下，在使用时首先将第一缓冲液在室温下平 衡15分钟后再使用。