[发明专利]一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于，包括 第一缓冲液、第二缓冲液和试剂卡；

所述第一缓冲液为含有0.83～2ng/μl兔抗人肝素结合蛋白抗体的磷酸盐 缓冲液；所述第二缓冲液为含有0.05～0.2μg/μl荧光标记的鸡抗兔二抗的磷 酸盐缓冲液；

所述试剂卡包括试纸条，所述试纸条包括塑料垫板，塑料垫板上设置硝 酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上左右间隔设置检测线和质控线，检测线左侧硝 酸纤维素膜上设置玻璃纤维素膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸， 玻璃纤维素膜上设置滤血膜；所述检测线上包被鼠抗人肝素结合蛋白抗体； 所述质控线上包被羊抗兔抗体。

2.如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其 特征在于，所述试剂卡还包括外壳，所述外壳包括连接在一起的上盖和下盖， 所述上盖上设置有血样孔和检测窗；所述血样孔的位置对应滤血膜的位置； 所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置，使检测线和质控线处在检测 窗中。

3.如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述检测线上鼠抗人肝素结合蛋白抗体的包被量为0.2～0.8μ g/cm。

4.如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述质控线上羊抗兔抗体的包被量为0.5～1.4μg/cm。

5.如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述荧光标记的鸡抗兔二抗为异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二 抗。

6.如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述检测线和质控线之间的间隔距离为5mm～10mm。

7.如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述试纸条的宽度为3～6mm。

8.如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH＝6.5～7.3，磷酸盐浓度为30～80mmol/L。

9.如权利要求5所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其 特征在于，所述试剂盒的使用方法的操作步骤包括：

Ⅰ：取不同浓度的肝素结合蛋白标准品加入到第一缓冲液中，然后再加 入第二缓冲液，混合均匀后加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置10～15min 后，将试剂卡插入荧光免疫读数仪，设定激发光为494nm，发射光为518nm， 读取不同浓度肝素结合蛋白标准品的荧光值，并将荧光值与肝素结合蛋白的 标准品的浓度值进行线性分析，绘制荧光值和肝素结合蛋白浓度值标准曲线， 得到荧光值和肝素结合蛋白浓度关系式；

Ⅱ：取待测样品加入到第一缓冲液中，然后再加入第二缓冲液，混合均 匀，加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置10～15min，将试剂卡插入荧光 免疫读数仪，设定激发光波长为494nm，发射光波长为518nm，读取待测样 品的荧光值，将该荧光值带入步骤Ⅰ得到的关系式中，计算得到待测样品肝 素结合蛋白的浓度。

10.一种如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂 盒的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

1)制备第一缓冲液：取兔抗人肝素结合蛋白抗体加入磷酸盐缓冲液中， 混合均匀，即得第一缓冲液；

2)制备第二缓冲液：取荧光标记的鸡抗兔二抗加入磷酸盐缓冲液中，混 合均匀，即得第一缓冲液；

3)制备试剂卡：取硝酸纤维素膜，标记出检测线和质控线，然后在检测 线上喷点包被鼠抗人肝素结合蛋白抗体，在质控线上喷点包被羊抗兔抗体， 然后将硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、吸水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板 上，并切割成所需宽度的试剂卡；

4)将步骤1)制备的第一缓冲液、步骤2)制备的第二缓冲液、步骤3) 制备的试剂卡，组装，即得所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂 盒。