[发明专利]一种铁皮石斛组培接种方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛组培接种方法，其特征在于包括以下步骤：

1）铁皮石斛果荚的选择：选择露天仿野生栽培3-6年生的铁皮石斛所结并生长110-130天所形成的成熟未开裂果荚；

2）种胚播种：将铁皮石斛果荚在超净工作台上经质量百分比浓度为65-75%的酒精消毒12-15min后，再将果荚内的种胚播种到无菌烧杯中；

3）无菌种胚混合液的制备：在步骤2）的无菌烧杯中加入无菌水并搅拌，将种胚分散在无菌水中，分散度为60-100个/mL，得到无菌种胚混合液；

4）萌发生根培养基的配制：以1/2MS培养基作为基础培养基，以该基础培养基的体积计，向该基础培养基中添加下列添加物：萘乙酸0.7-0.9mg/L、活性炭0.2-0.5g/L、6-苄氨基腺嘌呤0.05-0.2mg/L、椰汁50-80g/L、去皮香蕉30-50g/L、大米20-30g/L、蔗糖25-35g/L和琼脂5.8-6.3g/L，得到萌发生根培养基，并将该萌发生根培养基的pH值调至6.0~6.2，之后将配制的萌发生根培养基分装到带透气孔的650mL组培瓶中，每个组培瓶的灌液深度为3-4cm，然后将各个组培瓶在高压灭菌锅内于121℃灭菌20-23min，冷却后备用；

5）种胚的接种与培养：将无菌种胚混合液用无菌移液器接种到萌发生根培养基中，每个组培瓶的接种量为800-1000μL，再用无菌涂布棒涂平，将组培瓶的瓶盖旋紧，接种完成；之后将各个组培瓶于22-24℃下暗处理5-7天，然后在每日光照强度为1200-1500Lux、光照时间为10-11h的培养环境下培养30-40天，最后在每日光照强度为2500-3000Lux、光照时间为12-13h的培养环境下培养若干天，直至种胚萌发并得到铁皮石斛组培苗。

2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛组培接种方法，其特征在于步骤3）中，种胚的分散度的确定方法为：用移液枪移取1mL无菌种胚混合液，用无菌水稀释10倍后，对种胚进行计数，确定其分散度，若分散度不满足60-100个/mL的要求，则向无菌烧杯中补充种胚或无菌水，直至分散度满足要求。